上海江莱生物科技有限公司为您提供游离-白检测试剂盒elisa方法说明提要。
1待测样品孔中每孔加入待测样品100μl，每种样品设3个平行孔；设两个阴性对照孔，每孔加未处理组的细胞裂解液100μl；另设一个空白对照孔，加入纯细胞裂解液100μl。
2酶标板置4℃，包被过夜。
3洗板：吸干孔内反应液，用洗涤液过洗一遍将洗涤液注满板孔后，即甩去，之后将洗涤液注满板孔，浸泡1-2分钟，间歇摇动。甩去孔内液体后在吸水纸上拍干。重复洗涤3-4次。
4阴性对照孔每孔加入pbs 50μl，样品孔及空白孔每孔加入1:500稀释的兔抗人aif抗体工作液50μl。
5酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
6洗板，同4。
7每孔加1:5000稀释的hrp-标记的山羊抗兔抗体工作液 100μl。
8酶标板置37℃培养箱的湿盒内，孵育60min。
9洗板，同4。
10每孔加tmb显色液 100μl，轻轻混匀10s，置37℃暗处反应15-20min。
11每孔加100μl 2mol/l h2so4终止反应。
12分别测450nm 吸光值w1和630nm吸光值w2，终测得的od值为两者之差w1-w2，以减少由容器上的划痕或指印等造成的光干扰。
13数据处理：在得出标本s和阴性对照n的 od值后，计算s/n值。s/n***2.1为阳性判定标准。
游离-白 检测试剂盒elisa方法基础是抗原或抗体的固相化及抗原或抗体的酶标记。结合在固相载体表面的抗原或抗体仍保持其免疫学活性，酶标记的抗原或抗体既保留其免疫学活性，又保留酶的活性。在测定时，受检标本测定其中的抗体或抗原与固相载体表面的抗原或抗体起反应。用洗涤的方法使固相载体上形成的抗原抗体复合物与液体中的其他物质分开。再加入酶标记的抗原或抗体，也通过反应而结合在固相载体上。此时固相上的酶量与标本中受检物质的量呈一定的比例。加入酶反应的底物后，底物被酶催化成为有色产物，产物的量与标本中受检物质的量直接相关，故可根据呈色的深浅进行定性或定量分析。由于酶的催化效率-，间接地放大了免疫反应的结果，使测定方法达到-的敏感度。 elisa可用于测定抗原，也可用于测定抗体。
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沈阳药科大学-吴
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