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1.标准品的稀释与加样
2.加样：分别设空白孔空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同、待测样品孔。在酶标包被板上待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl样品终稀释度为5倍。加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将3048t的20倍倍浓缩洗涤液用蒸馏水3048t的20倍倍稀释后备用。
5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂a50μl，再加入显色剂b50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.
10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应此时蓝色立转黄色。
11.测定：以空白空调零，450nm波长依序测量各孔的吸光度od值。测定应在加终止液后15分钟以内进行。
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