细胞培养的传代及日常维持过程中,在培养器具、培养液及各种准备工作方面都需大量的耗费,而且细胞一旦离开活物开始原代培养,cs50冻存袋多少钱,它的各种生物特性都将逐渐发生变化并随着传代次数的增加和体外环境条件的变化而不断有新的变化。因此及时进行细胞冻存十分---。细胞冷冻储存在-70℃冰箱中可以保存一年之久;细胞储存在液氮中,温度达-196℃,理论上储存时间是没有---的。
自1977年以来,我们应用四级梯度降温冻存法对30余株哺乳动物细胞及2株节肢动物细胞共1000多支安瓶进行了冷冻保存,cs50冻存袋多少钱,效果较好,200-074-401冻存袋多少钱,大部分细胞的活存率在70%以上。在此基础上对8株抗登革4型(den一4)---杂交瘤细胞400多支安靓进行了冻存。鉴于四级降温冻存法步骤多,需要经过4℃冰箱和一20℃冰箱长达7~8小时的梯度降温,较难适应单工作中细胞冻存的需要。因此,自1982年以来我们摸索了影响细胞冻存的主要因素,冻存袋多少钱,确定了杂交瘤细胞冻存的适保护剂浓度(1.2〕,并研制成功细胞冻存简易装置。
生长---之培养细胞、新鲜培养基、dmso、无菌塑料冷冻保存管(nalgene 5000-0020)、等速降温机
(1)传统方法:冷存管置于4℃10分钟--->;-20℃30分钟--->;-8o℃16~18小时(或隔夜)--->;液氮槽长期储存。-20℃不可超过1小时,以防止胞内冰晶过大,造成细胞大量消失,亦可跳过此步骤直接放入-8o℃冰箱中。
(2程序降温:利用已设定程序的等速降温机以-1~-3℃/分钟之速度由室温降至-8o℃以下) -120℃,再放在液氮槽长期储存。适用于悬浮型细胞与hybridoma之保存。
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