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在选择固相萃取机理时,应根据目标化合物和干扰物的性质考虑采用哪种萃取机理,因为许多化合物同时具有多种功能基。例如:2----是一弱碱性化合物(pka=4.16),它在一定 ph条件下也可呈阳离子态,同时它又具有疏水性和亲水性的非极性---团。此时,应根据样品基质的具体情况,选择有利于从干扰物中分离目标化合物的萃取机理。当样品基质中同时含有大量非极性干扰杂质时,应尽量避免采用非极性萃取机制,而应采用以 pka以下两个 ph单位或以 ph=2.16为限的阳离子交换机制。相反,如果样品中同时含有大量干扰杂质阳离子,则应调整样品 ph值至6.16 (比 pka 2单位高),采用非极性萃取机制更为有利。
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骨架形状,粒径,孔径
硅的基质形态一般可分为非晶态和球态。无定型c18材料具有较高的性能价格比,是初步提纯的首1选。且c18具有较好的颗粒均一性、较高的柱效和分离性,但相对价格可能稍高,可作为精制的选择。
现在市场上可供选择的填料粒径很多,中低压备通常是为了增大上样量,增加流速,减小压力而选用大粒径填料;由于可以达到较高的柱效,因此小粒径填料更适合高1效液相或高压制备。在选择填料时还应充分考虑孔径,分子量小于5000 da时选择孔径(80~120 da),而对于蛋白质大分子分子量20000 da左右、分子量大于20000 da的样品,通常不采用c18分离模式,采用 sec等模式进行分离。
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spe技术分离效率较低,主要用于处理样品。借助于 spe测试技术,可实现以下目标:将干扰后续分析的物质去除;富集微量组分,提高分析灵敏度;将试样溶剂变换,使其与分析方法匹配;原位衍生;试样脱盐;试样存储和运输方便。
固相电柱:填料粒径不同于 hlpc柱,其它部分相同。用得很多的是c18。该填料具有很强的疏水性,在水相中保留了大部分有机物质;同时使用了其它具有不同选择性和保留性的材料。spe相中含有活性基团或活性化合物,可用来分析衍生化反应。防腐板:非常类似于膜过滤器。盘状萃取器是 ptfe片状填料或装有填料的玻璃钢片状填料;填料占 spe片状总填料的60%~90%,片状盘厚约1 mm。与种不同的是床层厚度/直径比(l/d)。适用于富集水中微量污染物。
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固相微萃取是一种新的样品预处理和浓缩技术,属于选择性非溶剂萃取方法。固相微萃取是近几年来国际上兴起的一种样品分析前处理技术,是在固相萃取的基础上发展起来的,它保留了所有的优点,摒弃了用柱状填料和用溶剂来解吸的弊端,只需一个类似进样器的固相微萃取装置就可以完成全部的前处理和进样工作。
固相微萃取主要是对有机物质进行分析,根据有机物质和溶剂“相似者相溶”的原理,利用石英纤维表面的色谱固定相对分析组分的吸附作用,从样品基质中萃取组分,逐步富集,完成样品前处理过程。进样时,采用高温气相色谱进样器,采用液相色谱、毛细管电泳等流动相将吸附组分从固定相解吸出来,用色谱仪分析。
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固相萃取小柱 spe工艺的基本步骤:
上样:将预处理过的样品倒入活化的 spe小柱中,然后采用加压、抽真空或离心等方法,使液体样品在 spe小柱中以适当速度流过。淋洗:选择强度适中的混合溶剂,在可能情况下清洗去除干扰组分,而不会导致目标萃取物流丧失;洗脱:用小体积的适当洗脱溶剂洗脱和收集分析物;将干燥溶剂备用或直接在线分析。
洗脱剂的强度选择非常重要,要达到分析物尽可能地被洗脱而吸附比分析物强的杂质仍然留在 spe小柱上而不被洗脱的效果。
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选用 spe柱规格的原则是,首先要--- spe柱的填料具有足够的容量,以便将目标化合物100%保留在柱体上。另外,填料也不易过量。
填充物越多,溶剂对目标化合物的洗脱效果就越好。所以在选择 spe柱规格时,一定要考虑 spe柱的容量。柱容是指一单位的填料以主要力保持其。
键合型硅胶柱容量一般为1%~5%。例如, spe柱的填料为100 mg,其大容量一般不超过5 mg。该离子交换剂柱容量约为0.5~1.5 meq/g。
通用规格:100 mg/1毫升,200 mg/3毫升,500 mg/3毫升,1毫升/6毫升等。例如,在100 mg/ml中,100 mg/ml为填料,1 ml为空柱管体积,也就是“总填料所占的体积”。
一次使用:为了避免交叉污染,---检测的---性, spe柱一般一次使用。
固相萃取小柱主要作用及目的:用于样品分离、提纯、富集,减少基质干扰,提高检测灵敏度
消除基体干扰:固相萃取可有效去除干扰物质,从而---高灵敏度、高选择性和 hplc/ms稳定---地联用
减少离子抑制:在 hplc/ms联用分析中,固相萃取可有效去除引起离子抑制的主要物质。消除这些干扰物可以提高质谱的相关性,从而降低 zui的低定量---。
目标分析物浓缩:通常情况下,目标化合物的浓度往往很低,以致于不能准确地定量。固相萃取可以在不富集干扰物的情况下富集分析物。
改进分析系统性能:固相萃取可以提高分析系统的性能,如:延长分析色谱柱的使用寿命,减少系统停机和维护时间;降低离子抑制作用至零度,提高信号对应性。
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