内切酶常用指南「友名生物」

一般是以微生物属名的第yi个字母和种名的前两个字母组成，第四个字母表示菌株品系。例如，从bacillus amylolique faciens h中提取的---性内切酶称为bam h，在同一品系---中得到的识别不同碱基顺序的几种不同特---的酶，可以编成不同的号，如hindⅱ、hindⅲ，hpai、hpaⅱ，mboi、mboⅱ等。

别名：restriction endonuclease简称---酶

酶反应：---性内切酶能分裂dna分子在一限定数目的专一部位上。它能识别外源dna并将其降解。

单位定义：在指明ph与37℃，在0.05ml反应混合物中，1小时---1μg的λdna的酶量为1单位。

性状制品不含非专一的-水解酶由10单位内切酶与1μg λdna，保温16小时所得的凝胶电泳图谱的稳定性表示，这类酶主要是从原核生物中分离出来的，迄今已经从近300多种不同的微生物中分离出约4000种---酶。

质粒载体和外源ｄｎａ中---酶切位点的性质

    如今，质粒载体中---酶切位点的种类---繁多，因而通常都有可能找到某种带---酶切位点恰恰与外源ｄｎａ部分片段本身-二致的载体。这就具备一个不可1比拟的优点，也应是可以用相应的---酶---重组质粒崦回收外源ｄｎａ。另一种方案，则是把片段插入到载体中能产生匹配末端的任何位点中。例如，识别不同的六核苷酸的---酶bamhl和bglⅱ产生具有相同---末端的---酶切片段，这样用bglⅱ---而制备的外源ｄｎａ部分片段可以克1隆到用banhl---的质粒中。这通常会使接合序列不能被曾用于外源ｄｎａ或制备载体的任何一种酶所切开。然而很多清况下，用切点位于多克1隆序列侧翼的---酶进行---，可将片段从重组质粒中摘出。偶尔在质粒的以及外源ｄｎａ两端的---酶切位点之间，不可能找到“门当户对”的搭配关系。这时可用下面两种方案加以解决：

   1在线状质粒末端和或外源ｄｎａ部分片段的末端接上合成在接头或衔接头。

   2在得到控制的反应条件下，用大肠杆1菌ｄｎａ聚合酶i ｋlenow片段部分补平带3凹端的ｄｎａ部分片段。如第九章所讨论，这样常可以使那些不相匹配的---酶切位点转变为互补末端，从而促进载体和外源ｄｎａ的连接。因为部分补平的反应消除了同一分子两端彼此配对的能力，故连接反应过程中环化和自身寡聚化的机会也会有所降低

　　---性内切酶已有百余种，每种酶有其特定的核苷酸序列识别特---，酶的活性需mg+2来激1活。不同的酶也有许多差别：有些酶除需mg+2外，还需atp 等其他辅助因子的激1活;切割位点和识别序列间的距离不同;有的内切酶同时具有甲1基化作用。根据这些差别，可将---性内切酶分为i、ii 和iii 种类型。ii 型---性内切酶只需要二价镁离子的激1活，酶在其识别序列内切割双链dna，产生的各种dna部分片段具有相同的末端结构，而且大多数的ii 型酶可提供粘性未端，有利于片段再连接，大部分ii 型酶所识别的序列具有反向对称的结构，或称之回文结构。如ecori 和hindiii 的识别和切口分别为：

　　ecori ： g ↓aatt c hindiii ： a↓agct t

　　t tcga↑ a c ttaa↑g

---性内切酶的控制鉴定

---性内切酶的一个活性单位是指，在50μl 的反应体系里，采用随酶提供的 nebuffer，用1个小时的时间，---1μg底物dna所需要的酶量。酶切反应应在带盖的eppendorf 管中进行，选用技术-上所标明的适宜温度。在确定酶活性之前，浓缩的酶应该用的贮存液稀释成大约1,000 单位/ml。

控制

所有控制鉴定结果都公布在随酶提供的技术-上。