DU PLUS DNTP- 武汉友名生物

聚合酶链式反应pcr是一种用于放大扩增特定的dna部分片段的分子生物学技术，它可看作是生物体外的特殊dna copy，pcr的zui大特点是能将微量的dna大幅增加。因此，无论是化石中的古生物、历史人物的-，还是几十年前凶1---中凶1手所---的毛发、皮肤或---，只要能分离出一丁点的dna，就能用pcr加以放大，进行比对。这也是“微量证据”的威力之所在。由1983年美国mullis首先提出设想，1985年由其发明了聚合酶链反应，即简易dna扩增法，意味着pcr技术的真正诞生。到如今2013年，pcr已发展到第三代技术。1976年，中国科学家钱嘉韵，发现了稳定的taq dna聚合酶，为pcr技术发展也做出了基础性贡献。

pcr引物设计的基本原则

引物长度：15-30bp，常用为20bp左右。

引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c 过多易出现非特异条带。atgc建议随机分布，避免5个以上的piao呤或嘧1啶核苷酸的成串排列参照。

引物内部不应出现互补序列。

两个引物之间不应存在互补序列，尤其是避免3 ′端的互补重叠。

引物与非特异扩增区的序列的同源性不要超过70%，

引物3′末端连续8个碱基在待扩增区以外不能有完全互补序列，否则易导致非特---扩增。引物3端的碱基，---是zui末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，zui---择是g和c。

引物的5′端可以修饰。如附加---酶位点，引入突变位点，用生物素、荧光物质、地1高辛标记，加入其它短序列，包括起始密码子、终止密码子等。

pcr反应特---强：pcr反应的特---决定因素为：引物与模板dna特异正确的结合；碱基配对原则；taq dna聚合酶合成反应的忠实性；靶基因的特---与保守性。

其中引物与模板的正确结合是关键。引物与模板的结合及引物链的延伸是遵循碱基配对原则的。聚合酶合成反应的忠实性及taqdna聚合酶耐高温性，使反应中模板与引物的结合复性可以在较高的温度下进行，结合的特------增加，被扩增的靶基因片段也就能保持---的正确度。再通过选择特---和保守性高的靶基因区，其特---程度就更高。

复合pcr(multiplex pcr)技术

在同一反应中用多组引物同时扩增几种基因片段.如果基因的某一区段有缺失则相应的电泳谱上这一区带就会消失。复合pcr主要用于同一病原体的分型及同时检测多种病原体、多个点突变的分子病的诊断。

重组pcr技术

重组pcr技术是在两个pcr扩增体系中,两对引物分别由其中之一在其5°-端和3-端引物上带.上一段互补的序列混合两种pcr扩增产物.经变性和复性。两组pcr产物互补序列发生粘连。其中一条重组杂合链能在pcr条件下发生聚合延伸反应，产生一个包含两个不同基因的杂合基因。