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除上述方法外,背景扣除的方法也能消除干扰。gerhardt研究组[誓~8]在阵列电极上设计自参照电极,将其电流信号作为背景信号,在具体的分析测定中予以扣除,这种方法可消除在相同的极化电位下其它物质对谷氨酸氧化酶修饰电极的干扰。他们首先在电极表面修饰一层nafion ,避免抗坏血酸的干扰;随后,利用和牛白蛋白(bovine serum albumin ,bsa)交联法将谷氨酸氧化酶固定至阵列电极表面,用于记录氧化电流的总和;相邻的自参照位点仅修饰bsa和,用于记录背景氧化电流。二者电流之差用于谷氨酸的定量分析(图1a)。他们利用局部注射谷氨酸的模型,成功地将该生物传感器用于鼠脑谷氨酸原位的实时监测,并实现了自由活动大鼠在静息状态及应激压力下脑内谷氨酸的长期监测。
微透析取样技术自1972年问世以来,已被广泛应用于神经科学、药学和分析化学等多学科的研究中i4]。作为取样技术,该技术一般需要结合样品分离和检测,方可实现与脑化学相关的研究。电化学生物传感器由于具有高选择性和传感界面设计多样性等优点,因此微透析技术和高选择性生物电化学传感的有效结合,可形成在线电化学分析系统(online electrochemical system , oecs) ,实现部分神经分子(如---、乳酸、谷氨酸等)的直接检测[]。相对于使用样品分离的离线分离分析,oecs 具有时间分辨率高,样品保真,易与行为学研究相结合等优点[]。但是,无需样品分离的直接检测方法要求在线电化学传感器应满---下条件:(1)高选择性:应避免脑透析液中其它神经分子,如抗坏血酸、尿酸、---及其代谢物的干扰;(2)高灵敏度:可有效检测脑透析液中的低浓度物质,如---、谷氨酸、---等;(3)---的稳定性和重现性:可进---时程的流动分析;(4)多组分同时分析:多个传感器之间应无交叉干扰;(5)与生理学研究的兼容性;能够实现在复杂脑神经生理和病理条件下对于特定神。
mao等将0s-gel-hrp和次氧化酶同时固定在电极上,建立了检测次的在线电化学分析方法,将检测电压置于-200 mv ,避免了抗坏血酸等物质的干扰,也提高了检测的灵敏度。此外,他们将利用氧化酶构建在线分析方法的传统思路拓展,提出利用其它分子作为hrp电子传递媒介体发展在线分析方法的新策略is8],通过在电极表面电聚合麦尔多拉蓝(meldola sblue,mb),实现了hrp与电极之间的界面电子转移,建立了---和测定的在线电化学分析方法。
ecs 的研究方法按测量方法可分为形貌测量法(电子显微镜)、电化学方法(电位法,伏安法和安培法),光学方法和磁共振成像法;按ecs中分子传递方式可分为扩散方法和电渗方法;按探针递送方式可分为直接注射法,离子导入法和压力导入法。本文以ecs两个主要生物物理参数(α和入)为测定对象,对ecs 的主要研究方法进行分类评述。
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