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恒温快速扩增试剂盒应在怎样的温度下使用？

标准的era扩增试剂盒经过配制可在37℃-42℃的温度范围内操作。过高的温度会对反应体系产生不利的影响，因为酶会逐渐地失去全部活性。对于rt试剂盒，我们建议客户在40℃下运行反应，因为逆转录酶在稍高温度下具有更高的活性。

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恒温快速扩增试剂盒常用酶原料

尿dna糖基化酶尿dna糖基化酶(udg酶)又称尿-n-糖基化酶(ung酶)，可水解含尿的单链和双链dna释放出游离尿，而对rna无活性，与dutp搭配使用，可建立成pcr防污染体系。其原理如下：在pcr体系-dttp部分或全部替换为dutp后，使得反应生成含有du碱基的扩增产物，这些扩增产物不同于天然模板，在进入含有udg酶的反应体系时，可被udg酶识别并切割尿碱基与糖磷酸骨架间的n-糖基键，而经切割后的dna链在碱性或高温条件下易于断裂降解，从而失去被当作模板再扩增的能力，因此可防止扩增子污染如下图。市面上的udg酶主要有普通型和热敏型，其中热敏型udg酶在室温条件下即可催化反应，50℃以上加热可使其灭活，防止其降解后续pcr形成的含du扩增产物。虽然udg/dutp体系具有防污染功能，但在实际测试中还得-pcr的效率和灵敏度。一方面需-pcr扩增产物掺入足够量的尿碱基，从而可被udg有效切割；另一方面也需要-反应体系添加的dutp不会明显影响pcr效率，因此dttp和dutp的佳比例需通过优化确定。

恒温扩增试剂盒常用酶简介

rpa相关酶

重组酶聚合酶扩增技术(recombinase polymerase amplification, rpa)是一种多酶协作的反应体系，详细原理可参考充满-力的恒温扩增技术:rpa、rca、sda、hda。该体系反应酶包含三种：重组酶：可与引物结合形成复合体，定位至与引物同源的靶序列，促使引物与模板结合，同时帮助dna解链，以便启动扩增；单链dna结合蛋白：可与被置换出的dna单链结合，稳定单链结构；dna聚合酶：如bsu dna聚合酶，用于dna链合成，同时具有链置换功能。对于rna模板，需在反应中加入逆转录酶形成rt-rpa体系；若利用标记探针进行检测，还需加入-酶对探针序列进行切割，常用-酶有-内切酶 iv(endonuclease iv, nfo)和-外切酶 iii(exonuclease iii, exo)，或者可与crisps/cas系统搭配使用。

恒温快速扩增试剂盒应在什么样的温度下应用？ 

规范的era扩增试剂盒通过配置可在37℃-42℃的温度范畴内实际操作。过高的温度会对反映管理体系造成不好的危害，由于酶会慢慢地丧失所有活性。针对rt试剂盒，大家-用户在40℃下运作反映，由于逆转录酶在稍高温度下具备更高的活性。 立博泰业——很多年市场销售恒温快速扩增试剂盒，企业坚持不懈用户为造物主，想用户之所感，急用户之所急，以诚为本，注重信誉度，以商品求发展趋势，以品质谋发展，大家诚挚地热烈欢迎各位同仁协作共赢未来。