注意事项
1. 为了避免蛋白-性，不要对样品剧烈搅动和反复冻融。
2. 缓冲溶液成分尽量模拟细胞内环。。
3. 为了避免蛋白质的氧化，将 0.1～1 mmol/ldtt二硫苏糖醇(或 β-巯加入到缓冲溶液中。
4. 为了避免重金属对目标蛋白的破坏，将 1～10 mmol/ledta 金属螯合剂加入。
5. 为了避免微生物生长，使用灭菌溶液。在纯化任何一种蛋白质的时候，均必须时刻对它的稳定性注意维护，使它的活性得到保护，需要牢记如下一些通用的注意事项。
6. 尽可能置于冰上或者在冷库内进行操作。
7. 蛋白浓度不要太稀。
8. 除非是进行-层。否则 ph 需要合适，pcr实验室，防止所使用的缓冲溶液 ph 与 pi 相同，使蛋白质的沉淀得以避免。
9. 使用蛋白酶，避免蛋白酶对目标蛋白的降解；在纯化细胞中的蛋白质时，将 dna 酶加入来使得 dna 降解，避免 dna 对蛋白的污染。
22.同样的od用page检测，eb染色为什么深浅不一？
答：通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna)，因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna，由于碱基组成不同，形成二级结构的可能性不同，eb的染色程度也会有差异，比如oligo(dt)等不形成二级结构，南充pcr，eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量，而用紫外分光光度计检测。同样道理，用eb染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果？
答：引物不纯可能会导致：1)非特-扩增；2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开，-是没有保护碱基的引物；3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物，为什么原先使用正常，而过一段时间再使用就不好了？
答：如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或-酶，会使引物降解。使用时没有充分解冻混合，液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物，实时荧光定量pcr，避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物，因为有些蒸馏水的ph值比较低ph4-5，fish检测， 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题，而是pcr使用材料-是模板的与先前使用的不完全一致。
3.引物的od数如何定量？
答：引物合成引物od数是这样测定的：用紫外分光光度计，波长260nm，石英比色杯，光程为1厘米，测定溶液的光密度。测定时溶液的光密度好稀释到0.2-1.0之间。dna干粉用一定体积的水充分振荡溶解以后，用1ml水稀释测od值。需要根据稀释倍数换算出母液的od值。
4.需要什么级别的引物？
答：引物常用的纯化方式脱盐、biorp / opc纯化、page纯化、hplc纯化。根据实验需要，确定订购引物的纯度级别。
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