PCR-南京英瀚斯生物科技-PCR

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转录组测序

转录组即某个物种或特定细胞在某一功能状态下产生的rna的总和,是研究细胞表型和功能的一个重要手段。与基因组不同的是,pcr,转录组的定义中包含了时间和空间的限定。同一细胞在不同的生长时期及生长环境下,其基因表达情况是不相同的。转录组测序rna-seq是指利用第二代高通量测序技术进行cdna测序,快速地获取某一物种特定qi官或组织在某一状态下的转录本。相对于传统芯片而言,rna-seq无需预先设计探针,即可对物种的细胞类型的转录组进行检测,能够提供较的数字化信号,更高的检测通量以及更广泛的检测范围,是目前深入研究转录组复杂性的-工具。







5.长可以合成多长的引物?

答:引物越长,出现问题的概率就越大。有的公司合成过120base的引物,产率很低。除非需要,建议合成片段长度不要超过80mer,按照目前的引物合-率,80mer的粗产品,全长还不一定正确引物的百分比不会超过40%,后续处理还有丢失很多,的产量很低。

6.需要合成多少od数?

答:根据实验目的确定。一般pcr扩增,2 od引物,可以做200-500次50ul标准pcr反应。如果是做基因拼接或退火后做连接,1 od就足够了。但是有些研究人员,实时定量pcr,就做几次pcr,但是却要5-10 od。做全基因构建的引物都比较长,但是我们有些研究人员也要求高od数。片段越长, 全长得率就越低,出错的几率就越大。超出需要之外的od数要求,其实也是对社会资源的一种浪费,同时也从一个侧面反映了部分研究人员-是新手的自信心不足,总觉得需要重复多次才能成功。





rna提取预备工作

rna酶rnase是导致rna降解主要的物质。此酶非常稳定,pcr实验室,在一些的条件下只可暂时失活,但-因素去除后又迅速恢-性。常规高温高压灭菌方法和蛋白抑制ji不能使所有的rnase完全失活。

1.它广泛存在于人的皮肤上,因此制备rna时必须戴手套

2.rnase的又一污染源是取液器。根据取液器制造商的要求对取液器进行处理。一般情况下采用以depc配制的70%-擦洗取液器的内部和外部,可基本达到要求。

3. 塑料制品、玻璃和金属物品的处理

1塑料制品:尽量使用-无菌塑料制品。已标明rnase-free的塑料制品,如没有开封使用过,通常不必再处理。



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