活性菌量丰富
活性微生物数量是肥效得以充分发挥的基础。任何一种微生物肥料都必须含有足够多、有活性的特定微生物,这些特定微生物的数量和纯度直接关系到微生物肥料的应用效果,是衡量微生物肥料的重要标志。当微生物肥料中特定微生物的数量降低到一定程度,或纯度达不到要求时,肥效就会降低甚至失效。由于菌体的存活时间有限,低温生物菌种报价,因此微生物肥料的有效期也是衡量微生物肥料的重要因素。
也称种子制备,是指菌种在一定条件下,经过扩大培养成为具有一定数量和的纯生产菌种的制备过程。以作接入发酵罐中进一步扩大菌体量及合成产物之用。种子制备包括孢子制备和菌丝体制备见图,其中(1)~(4)为孢子制备过程。保存在沙土管或冷冻管中的生产菌种,用无菌手续挑取少许,接入琼脂斜面培养基上,在25℃或较高温度下培养5~7天(或较长时间)。所得孢子还需进一步用较大表面积的固体培养基以获得更多孢子,低温生物菌种价格,对于霉菌类孢子制备,多数采用大米、小米之类的天然培养基。将培养成熟的斜面孢子制成悬浮液,接种到扁瓶固体培养基上,于25~28℃培养14天。将成熟的扁瓶孢子于真空中抽干,使水分降至10%以下,并放入 4℃冰箱中备用。一次制得的孢子瓶可在生产上延续使用半年左右。菌孢子的培养基大多是采用麸皮或豌豆浸出液、-及无机盐与琼脂制成的。将斜面孢子接入扩大的扁瓶孢子培养基中,于28~37℃培养5~14天。所获得的大量孢子可直接作为种子罐 (6)的种子。如果有些生产菌种不产孢子,如产生菌或产孢子不多的,则可采用摇瓶5液体培养制得菌丝体,作种子罐的种子。种子罐的目的是使接入有限的孢子或菌丝体迅速发芽、生长、繁殖成大量菌体。其中的培养基组分应是易于被菌体利用的碳源如-和氮源如玉米浆等,及无机盐(如磷酸盐)等。作为发酵罐(7)的种子应是生命力旺盛、染色深、菌丝粗壮,无杂菌及异常菌体。接种量一般在10%~20%。
实验室的传代保藏过程
1. 按说明书要求复溶菌粉,转种于适当的增菌培养基内g1,复壮后转接至平板上,并于适当温度下培养适当时间,分离出单个纯种菌落,此为第2代g2。
2. 鉴定完成后,挑取纯菌落制成浓菌悬液用于制备甘油冷冻管,同时挑取纯菌落转接斜面作为工作用。此时,保藏为第2代,但工作用则为第三代。
3. 将第2代管冷冻保存,低温生物菌种公司,将工作用于适当温度下培养适当时间后可用于试验。
4. 取一支冷冻保存的g2代转种于平板和斜面培养基上,平板上的制成冷冻保藏管第三代g3,斜面培养基经适当温度下培养适当时间后用作工作用w3。
5. 将第三代g3冷冻或低温保存,将生长、转种后的g2经灭菌处理后丢弃。
6. 当工作用代数小于5时,可直接用上一代工作用转接下一代工作用,如w3可直接转接为w4。
7. 按上述程序操作,直至g4转为w5为止,需重新开启安瓿,低温生物菌种,再重复上述操作程序、保藏和使用。
以上方法中,被分为两类。传代用和工作用,传代用用于甘油冷冻管法保藏,工作用用斜面低温保藏法保藏。
实验证明,甘油冷冻管的有效期至少为2年,但其主要适用于-需氧、酵母菌的传代、保藏、-和芽孢类-则需应用其它方法。
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