杂交流程
杂交液的成分主要影响了-杂交的复性动力学和热稳定性。杂交液的基础成分为:denhardts溶液ficoll,原位杂交公司,bsa,pvp,异源-如鲱精3子dna/trna/竞争dna,磷酸钠,edta,sds,盐离子,-胺和-葡聚糖,以及杂交探针。不同的应用中进行杂交温度、ph、盐离子、-胺、探针浓度等条件的优化。常用的ph范围为6.5~7.5,较高的ph值有助于提高杂交的严谨性。
就dna探针和rna探针的比较,dna探针在杂交过程中会出现探针双链之间退火的可能,也更倾向于在溶液中形成大分子的探针聚合体,从而影响其渗透能力。而rna 探针的应用,将提高dna-rna杂交子的热稳定性。
tips:rna探针因其单链、高分子结合力、可适应高温杂交的特性,其检测特-和灵敏度均优于dna探针。常用的rna探针标记方法为构建质粒后进行转率合成。通过pcr扩增的方法,可以更方便地进行rna探针的制备;rna探针合成后,还需验证其对目标片段检测的灵敏度和特-。
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