原位杂交-思特进

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2021-9-1  
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原位杂交组织或细胞化学技术简称原位杂交in situ hybridization, ish是应用已知碱基顺序并带有标记物的-探针与组织细胞内待测的-,原位杂交,按碱基互补配对原则进行特-结合,形成杂交体,然后用与标记物相应的检测系统,通过组织化学或免3疫组织化学方法在-原有位置进行细胞内定位、定性和定量研究。为分子水平研究细胞内基因表达及有关细胞5因子的调控提供了有效的工具。可视为组织化学与免3疫组织化学的重大突破。

原位杂交不需要从组织中提取-,对于组织中含量极低的靶序列有-的敏感性,并可完整地保护组织和细胞的形态,更能准确地反映出组织细胞的相互关系及功能状态。





杂交流程

杂交液的成分主要影响了-杂交的复性动力学和热稳定性。杂交液的基础成分为:denhardts溶液ficoll,bsa,pvp,异源-如鲱精3子dna/trna/竞争dna,磷酸钠,edta,sds,盐离子,-胺和-葡聚糖,以及杂交探针。不同的应用中进行杂交温度、ph、盐离子、-胺、探针浓度等条件的优化。常用的ph范围为6.5~7.5,较高的ph值有助于提高杂交的严谨性。



原位杂交是指将特定标记的已知顺序-为探针与细胞或组织切片中-进行杂交,从而对特定-顺序进行精3确定量定位的过程。原位杂交可以在细胞标本或组织标本上进行。

原位杂交技术(in situ hybridization,ish)是分子生物学、组织化学及细胞学相结合而产生的一门新兴技术,始于20世纪60年代。

原位pcr;原位杂交细胞定位和pcr的高灵敏度相结合的技术,在细胞爬片、甩片或涂片或组织石蜡、冰冻切片上直接对靶基因片段进行扩增,通过掺入标记基团直接显色或结合原位杂交进行检测的方法。



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