深圳万邦科技有限公司为您提供荧光探针法pcr检测经销。pcr技术的定量原理:
扩增曲线
在real-qpcr中,对整个pcr反应扩增过程进行了实时的检测并记录其荧光信号,随着反应的进行,监测到的荧光信号可以绘制成一条曲线,即为扩增曲线。荧光扩增曲线一般分为基线期、指数增长期和平台期。
在real-timeqpcr扩增早期,扩增的荧光信号被荧光背景信号所掩盖,无法判断产物量的变化,此时即为基线期。
pcr反应过程中产生的dna拷贝数是呈指数形式增加的,随着反应循环数的增加,终pcr反应不再以指数形式生成模板,从而进入“平台期”。在该时期,扩增产物已不再呈指数级的增加,pcr的终产物量与起始模板量之间无线---,所以根据终的pcr产物量不能计算出初始模板量。
荧光染料的优点:
产品仅用于科研使用简便;
可以与任何pcr产物结合;
价格便宜;
荧光染料的缺点:
不能区分不同的双链dna
引物二聚体会影响检测的敏感性
非特---产物会影响结果的敏感性
引物二聚体和非特---扩增问题可以通过熔解曲线(meltingcurve)进行识别,进而通过pcr引物的设计和反应条件的优化得以解决。总的来说,sybrgreeni方法是一种基础也的real-timeqpcr实验手段。
更多:pcr-荧光探针法
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