固相载体的选择:许多物质可作为固相载体,如聚氯乙l烯、聚-乙l烯、聚丙-和纤维素等。其形式可以是凹孔平板、试管、珠粒等。常用的是40孔聚-乙l烯凹孔板。不管何种载体,在使用前均可进行筛选:用等量抗原包被,在同一实验条件下进行反应,观察其显色反应是否均一性,据此判明其吸附性能是否-。
对于生长的组织培养液中的细胞,首先移除培养基,然后加入0.1m hcl处理细胞。孵育10分钟并观察细胞是否被裂解;如果裂解不充分,接着孵育10分钟并观察。以大于600g离心力于室温离心,收集上清直接用于实验。临用前在0.1m hcl中加入0.1%至1%浓度的triton-x 100可增强细胞和组织裂解。在这个浓度范围内,去污剂并不干扰试验的结合部位,但是会适度的增加光密度值。含有triton的样品需利用标准曲线估计浓度,为了较精l确的测定,标准曲线需以相同方式稀释。取1 ml细胞培养上清加入10μl浓-,600g离心力于室温离心,上清液直接用于实验测定分析。
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