逆转录酶逆转录酶又称反转录酶,是一种rna介导的dna聚合酶,其反应过程中体现出三种功能为:以rna作为模板合成互补dna链 (complementary dna, cdna),形成rna:cdna杂交链;发挥rnase h活性,降解rna:dna杂交链中的rna模板;以cdna作为模板合成第二链dna,形成双链dna如下图。其中,rnaseh活性是逆转录酶的一个内在特性,可在合成过程中同时切割rna:cdna杂合链中的rna模板,该特性可能降低逆转录效率,试纸条型wlre8205kit试剂盒公司,因此在实际应用中,常采用人工改造后的低或无rnase h活性的逆转录酶。常用的逆转录酶有amv和m-mlv,试纸条型wlre8205kit试剂盒价格,amv分离自禽类成髓细胞瘤---(avian myeloblastosis virus, amv),m-mlv逆转录酶分离自莫洛尼氏鼠---(moloney murine leukemia virus, mmlv),前者热稳定性优于后者,但amv逆转录酶的rnaseh活性也---,试纸条型wlre8205kit试剂盒,不利于长片段cdna合成。市面上多使用经基因工程改造过的m-mlv逆转录酶,其热稳定性改进,可在50℃左右工作,同时rnase h活性进一步减弱,试纸条型wlre8205kit试剂盒,提高了其逆转录效率。
tma相关酶
依赖转录介导扩增(transc ription mediated amplification, tma)的扩增模板为rna或单链dna,检测的扩增产物为rna,详细原理可参考转录介导的---扩增技术小结。该体系所用酶有两种:m-mlv逆转录酶:用于模板rna逆转录成dna,并在逆转录过程中通过引物引入转录启动子序列,用于后续转录过程;t7 rna聚合酶:以逆转录形成的dna为模板,转录合成检测产物rna。
如果在无模板对照中观察到假阳性结果,则通常是由污染引起的。我们建议区分试剂配制区和扩增分析区。在使用任何扩增后打开反应管的终点检测方法时,必须采用严格的污染控制措施。要排除或清除污染,我们建议用消毒液或 75%的酒精对工作区域进行消毒,并使用新的扩增试剂溶解剂等。可能需要重复几次清洁,才能完全清除污染。
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