3d细胞培养
3d多细胞肿liu球是在体外应用组织培养方法使肿liu细胞以多细胞集聚体的形式生长成为具有三维结构的球体。与传统的2d贴壁细胞培养模型相比，3d多细胞肿liu球可以通过模拟三维细胞网络、细胞与基质、细胞与细胞之间的相互作用，从而贴近肿liu组织中相应的病理生理特征。因此， 3d多细胞肿liu球培养模型已经逐渐应用于gan细胞培养和分化、ai症研究、yao物和毒性筛选及组织工程等特定应用中。虽然3d多细胞肿liu球模型具有更---的实体肿liu生理相关性，但是与2d贴壁细胞培养模型相比，获得大量相对统一的3d多细胞肿liu球模型需要-系列的培养过程和表征手段。
1、操作步骤 [方法一]：
(1) 细胞培养：取 6 孔培养板 (或用 35 mm 培养皿)，向每孔中加入 2 ml 含 1～2×105 个细胞培养液，37℃ co2 培养至 40%～60% 汇合时 (汇合过分，转染后不利筛选细胞)。
(2) 转染液制备：在聚---乙稀管中制备以下两液 (为转染每一个孔细胞所用的量)a 液：用不含培养基稀释 1-10 μg dna，终量 100μl，b 液：用不含培养基稀释 2-50 μglr，终量 100μl，轻轻混合 a、b 液，细胞迁移实验，室温中置 10-15 分钟，稍后会出现微浊现象，但并不妨碍转染 (如出现沉淀可能因 lr 或 dna 浓度过高所致，应酌情减量)。
(3) 转染准备：用 2 ml 不含培养液漂洗两次，再加入 1 ml 不含培养液。
(4) 转染：把 a/b 复合物缓缓加入培养液中，细胞生物学，摇匀，流式细胞检测，37℃ 温箱置 6～24 小时，吸除无转染液，换入正常培养液继续培养。
(5) 其余处理如观察、筛选、检测等与其它转染法相同。
注意：转染时切勿加，对转染效率有很大影响。
细胞传代培养
操作步骤
1.将长满细胞的培养瓶中原来的培养液弃去。
2、加入0.5- -1ml 0.25%胰酶溶液，使瓶底细胞都浸入溶液中。
3、瓶口塞好橡皮塞，放在倒置镜下观察细胞。随着时间的推移，原贴壁的细胞逐渐趋于圆形，在还未漂起时将胰酶弃去，加入10m培养液终止---。观察---也可以用肉眼，当见到瓶底发白并出现细zhen孔空隙时终止---。一般室温---时间约为1- -3分钟。
4、用吸管将贴壁的细胞吹打成悬液，分到另外两到三瓶中，上海细胞，实践培养液塞好橡皮塞，置37°c下继续培养。第二天观察贴壁生长情况。
附:---液配制方法:
称取0.25克胰酶蛋白酶(活力为1 : 250)， 加入100ml无ca2+、mg2+的hanks液溶解，滤器过滤chu菌，4°c保存，用前可在379c下回温。胰酶溶液中也可加入edta，使zui终浓度达0.02%。
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