武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd,系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
组织样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后,称量冰冻组织样本并加入10倍体积的0.1m hcl混匀。室温以大于600g离心力离心,取上层清夜用0.1m hcl稀释至适当浓度。
武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd,系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等,c--- antibody,与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系,产品销往。
体外用gtpγs/gdp处理蛋白以用作阳性和阴性的对照
注意:在细胞体内环境条件下大约有10%的ras被激l活,而在体外用gtpγs处理大约有90%的ras被激l活。
1.
准备两个离心管,每个管中各加入0.5 ml的细胞提取物如果是纯的ras蛋白则每个管中加入的蛋白量为1ug。
2.
每个管中加入20ul 0.5m edta(终浓度即为20 mm)。
3.
一个管中加入5ul的100x gtpγs终浓度即为100 um作为阳性对照。另一个管中加入5ul的100x gdp终浓度即为1 mm作为阴性对照。
4.
将离心管置于30°c条件下反应30 min并不断搅动。
5.
终止反应:将管置于冰上并加入32.5ul 1m mgcl2(终浓度即为60mm)。
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