22.同样的od用page检测,eb染色为什么深浅不一?
答:通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna),因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna,由于碱基组成不同,形成二级结构的可能性不同,eb的染色程度也会有差异,pcr引物设计,比如oligo(dt)等不形成二级结构,eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量,而用紫外分光光度计检测。同样道理,实时定量pcr,用eb染色来照片不适合所有引物。
23.引物不纯会有什么后果?
答:引物不纯可能会导致:1)非特-扩增;2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开,-是没有保护碱基的引物;3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。
24.已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?
答:如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或-酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物,因为有些蒸馏水的ph值比较低ph4-5, 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题,而是pcr使用材料-是模板的与先前使用的不完全一致。
单核苷酸多态性( snp )实验
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性 ,是由于单个核苷酸改变而导
实验方法原理:
snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导
腺-包装原理介绍
腺-是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺- 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.
腺-是一种无包膜的球型结构的-,遗传物质为线型 双股dna形式。腺-的特点:1gan染范围广对人致病性低;2对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;3能有效进行增殖; 4-滴度高;5不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺-的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。
实验方法
1.获得目的基因序列;
2.构建-表达载体质粒;
3.表达载体质粒和包装质粒重组;
4.gan染hek293,包装出-;
5.-扩增、浓缩;
6.滴度测定。
|