资阳PCR-南京英瀚斯生物科技-实时荧光定量PCR

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2022-10-13  
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22.同样的od用page检测,eb染色为什么深浅不一?

答:通常可以用eb染色的方法来判断双链dna的量(如质粒dna),因为eb可以嵌合到双链dna中。而合成的单链dna,由于碱基组成不同,形成二级结构的可能性不同,eb的染色程度也会有差异,pcr引物设计,比如oligo(dt)等不形成二级结构,eb染色效果就非常差。所以不要用eb染色的方法来定量,而用紫外分光光度计检测。同样道理,实时定量pcr,用eb染色来照片不适合所有引物。

23.引物不纯会有什么后果?

答:引物不纯可能会导致:1)非特-扩增;2)无法用预先设计在引物5′端酶切位点的酶切开,-是没有保护碱基的引物;3) 用于测序出现双峰或乱峰。解决办法重新合成或重新纯化。

24.已经溶解的引物,为什么原先使用正常,而过一段时间再使用就不好了?

答:如果溶解引物的水ph过低或污染了菌或-酶,会使引物降解。使用时没有充分解冻混合,液体不均匀也可能会造成引物加入量不准确。建议分装引物,避免反复冻溶。建议使用10mmt ris ph7.5缓冲液溶解引物,因为有些蒸馏水的ph值比较低ph4-5, 引物在这种条件下不稳定。还有一种可能性是引物没有问题,而是pcr使用材料-是模板的与先前使用的不完全一致。





单核苷酸多态性( snp )实验

snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性 ,是由于单个核苷酸改变而导致的-序列多态性(polymorphism)。据估计,在人类基因组中,实时荧光定量pcr,大约每千个碱基中有一个snp ,资阳pcr,无论是比较于度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ,都要广泛得多。

实验方法原理:

snp (single nucleotide polymorphisn即单核苷酸多态性,是由于单个核苷酸改变而导致的-序列多态性(polymorphism)。据估计,在人类基因组中,大约每千个碱基中有一个snp ,无论是比较于-性段长度多态性(rflp)分析还是微标记(str) ,都要广泛得多。snp是我们考察遗传变异的单位,据估计,人类的所有群体中大约存在一千万个snp位点。-般认为,相邻的snps倾向于一起遗传给后代。 于是,我们把位于染色体上某一区域的一组相关联的snp等位位点称作单体型( haplotype b大多数染色体区域只有少数几个常见的单体型(每个具有至少5%的频率),它们代表了一个群体中人与人之间的大部分多态性。-个染色体区域可以有很多snp位点,但是我们一-旦掌握了这个区域的单体型,就可以只使用少数几个标签snps(tagsnp)来进行基因分型,获取大部分的遗传多态模式。






腺-包装原理介绍

腺-是一种没有包膜的直径为79-90nm的颗粒,由252个 壳粒呈二十面体排列构成。每个壳粒的直径为7-9nm。衣壳里是线状双链dna分子,两端各有长约100bp的反向重复序列。人体腺- 已知有33种,分别命名为ad1-ad33,研究详细得是ad2.

腺-是一种无包膜的球型结构的-,遗传物质为线型 双股dna形式。腺-的特点:1gan染范围广对人致病性低;2对增殖和非增殖细胞均具有gan染性;3能有效进行增殖; 4-滴度高;5不整合到染色体中,无插入致突变性;(6)外源基因装载容量大。由于腺-的这些特点使其广泛地应用于体 外基因转导、体内接种yi苗、和基因zhi疗等各个领域。

实验方法

1.获得目的基因序列;

2.构建-表达载体质粒;

3.表达载体质粒和包装质粒重组;

4.gan染hek293,包装出-;

5.-扩增、浓缩;

6.滴度测定。







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