蛋白质双向电泳实验流程
1.-yi酸-bing酮沉淀法提取蛋白
2.双向电泳分离待测样品
(1)一相等电-前处理按照所用仪器的厂商提供操作手册进行。蛋白质上样浓度不要超过10mg/ml，否则会造成蛋白质的-或沉淀。
(2)等电-完毕后(约需24hr，若不立即进行第二相电泳，胶条可夹在两层塑料薄膜中于-70℃保存数月。
(3)等电-好的胶条按厂商提供的操作手册平衡两次。平衡完毕后，于电泳仪上用12.5%sds-page凝胶进行电泳分离。仪器设置为2.5w/胶 45min，15w/胶 5-8hr，20℃。
3.银染法对凝胶进行染色
(1)固定(2)清洗(3)增敏(4)清洗(5)染色(6)清洗(7)显影(8)定影(9)水洗
3.凝胶扫描及图像分析
(1)图像扫描：凝胶染色后采用image scanner以300dpi，16-bit模式65536灰阶进行扫描。
(2)图像分析：扫描完毕后，凝胶继续置于1%yi酸中于4℃保存。扫描后的图像用imagemaster 2d platinum software软件进行分析。分析按照软件厂商提供的说明书进行。以zui小点面积30，平滑度2为主要参数zui大限度检测蛋白质点。以目标蛋白质3个重复具有相同趋势，目标蛋白质相邻位点的相对一致性，至少2个重复有2倍以上差异作为判定差异表达蛋白质的标准。
5.长可以合成多长的引物？
答：引物越长，出现问题的概率就越大。有的公司合成过120base的引物，产率很低。除非需要，建议合成片段长度不要超过80mer，按照目前的引物合-率，80mer的粗产品，全长还不一定正确引物的百分比不会超过40%，pcr，后续处理还有丢失很多，的产量很低。
6.需要合成多少od数？
答：根据实验目的确定。一般pcr扩增，2 od引物，可以做200-500次50ul标准pcr反应。如果是做基因拼接或退火后做连接，1 od就足够了。但是有些研究人员，就做几次pcr，但是却要5-10 od。做全基因构建的引物都比较长，但是我们有些研究人员也要求高od数。片段越长， 全长得率就越低，出错的几率就越大。超出需要之外的od数要求，其实也是对社会资源的一种浪费，苏州pcr，同时也从一个侧面反映了部分研究人员-是新手的自信心不足，总觉得需要重复多次才能成功。
str检测
短串联重复(short tandem repeats， str)，又称微wei星dna(microsatellite dna)或简单重复序列(- repeat sequence， srs或ssr)，是广泛存在于原核生物和真核生物基因组中的核苷酸重复序列。有丝分裂过程中dna链之间的错配引起的fu制滑动被认为是导致str产生的较为常见原因，并且依据不同fu制单元大小的不同以及不同物种之间，fu制滑动发生的概率也不相同。
str是以序列 (core repeat units) 首尾相连多次重复形成。每个str的序列结构相同，长度为2-6bp，但其重复单位数目和重复区域的长度不同，因此str在不同种族、不同人群之间的分布具有差-，构成了str遗传多态性。不同个体之间在一个同源str位点的重复次数也不同，因而同指纹识别一样，str位点分析也可对个体进行身份识别。通过识别个体基因组在特定位点的特定序列重复，实时荧光定量pcr，即可创建其基因档案。基于此，str分析法已经成为一种重要的鉴定分析方法，应用于-学、qin子鉴定及细胞鉴定等领域。
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