注意事项
1. 针头大小与动物的种类有关，t 同时针头一定要磨钝。
2. 检查灌注泵的运作情况，一定排出管子的气泡和空气，防止空气栓塞。
3. 经腹腔暴腔，先清楚升主动脉外面的脂肪组织和心外膜组织。
4. 将针头经左心室插入升主动脉颜色变白的哦，并用钳子固定。
5. 解开右心耳，同时开启灌注泵。注意，不要-揭开-的其他部位，否则有时候可能会灌注成功但是绝大部分会造成灌注不成功，尤其。
6. 将 4 度的生理盐水好已动物的发白为标准，我们实验室的大鼠约用 250ml和- (根据所取得材料而定) 依次灌入。
7. 整个过程均应将动物放在冰上，以便于-地保存目的蛋白和酶的活性。
脑组织组化实验
1. 灌注固定用的针头，一般都用注she针头。灌注大鼠一般可用 10 到 12 号针头，小鼠可用 6、7 号针头，动物模型购买，但很重要的一点是要把针头的磨钝而不是用锐利的针头。
2. 关于穿刺：灌注大鼠时要把穿刺针的插入到升主动脉内，但不宜进入升主动脉过长，在动脉内见到针头或插入约 1mm 左右即可；灌注小鼠时只要把针头插入左心室内即可，不-插入到升主动脉内。操作的要点是：，无锡动物模型，操作要迅速，剪开膈肌后，迅速沿腋前线剪开胸壁，并把胸前壁往上翻，暴露-；第二，一定要在明视野下操作，要剪开心包壁层的前壁，暴露升主动脉和肺动脉干的根部，-穿剌针能进入升主动脉；第三，穿刺之前要用适当大小的血管钳夹住心室以固定-，但不要夹得过紧，要让心腔内留有一定的间隙，然后在心尖处轻轻旋转针头插入穿刺针。也可以用小剪刀在心尖处先剪开一个小口再插入穿刺针；第四，穿刺方向要正确，从心尖部开始，从左下方斜向右上方，基因敲除，若遇阻力要改变方向再试，-前动物实验，不要用力蛮插。
3. 灌注用生理盐水的量大鼠用 50ml 左右，小鼠用 10ml 左右，一般以从右心耳流出的液体清亮为标准；4% -用量约相当于老鼠体重，如 300 克的老鼠用 300ml 左右。小鼠一般用 20-30ml。灌注速度先快后慢，可持续 1-2 个钟头，也可以稍快。取脑后置脑块于 4% -内 4 度后固定 4-6 个钟头。
什么是sirna ？
小干扰 rna (sirna) 是由 20-25 个核苷酸组成的双链 rna 分子，在细胞中具有多种功能。在 rna 干扰 (rnai) 通路中，sirna 通过与互补 mrna 分子杂交干扰基因表达。这种干扰会触发 mrna 降解，进而抑制特定基因的基因表达。
sirna 于 1999 年由 david baulcomb 实验室shou次发现。2001 年，thomas tuschl 提出合成 sirna 会在哺乳动物细胞中- rna 干扰 (rnai)。如今，专门设计用于与 rna 靶序列杂交并使其降解的“合成”sirna 寡核苷酸已被广泛用于-细胞 rnai。靶 mrna 的降解能够有效“敲除”相应蛋白质的表达。然后可研究分析靶蛋白浓度降低造成的影响。
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