southern杂交
实验原理
southern印迹杂交southern blot是1975年由英-southern创建，是研究dna图谱的基本技术。southern印迹杂交是进行基因组dna特定序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖凝胶电泳分离经-性内切酶-的dnal片段，将胶上的dna变性并在原位将单链dnal片段转移至尼龙膜或其他固相支持物上，经干烤或者紫外线照射固定，河北pcr，再与相对应结构的标记探针进行杂交，用放l射自显影或酶反应显色，从而检测特定dna分子的含量。
动物组织细胞基因组dna提取
操作步骤
1. 取新鲜或冰冻动物组织块0.1g0.5cm3，尽量剪碎。置于玻璃匀浆器中，加入1ml的细胞裂解缓冲液匀浆至不见组织块，-怎么做，转入1.5ml 离心管中，加入蛋白酶k
500ug/ml20μl，混匀。在65℃恒温水浴锅中水浴30min，也可转入37℃水浴12～24h，间歇振荡离心管数次。于台式离心机以12000 rpm离心5min，取上清液入另
一离心管中。
2.加2倍体积异，倒转混匀后，可以看见丝状物，用100ul 吸头挑出，凉干，用200ul te 重新溶解。可进行pcr反应等，需要进一步纯化的按下列步骤进行
3.加等量的酚??振荡混匀，离心12000 rpm，实时荧光定量pcr，5min。
4.取上层溶液至另一管，加入等体积的?，振荡混匀，离心12000 rpm，5min。
5. 取上层溶液至另一管，加入1/2体积的7.5mol/l氨加入2倍体积的无水-，混匀后室温沉淀2min ，离心12000 rpm ，10min。
6.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉。
7.用1ml 70%-洗涤沉淀物1次，离心12000 rpm ，-， 5min。
8.小心倒掉上清液，将离心管倒置于吸水纸上，将附于管壁的残余液滴除掉，室温干燥。
9.加200ul te重新溶解沉淀物，然后置于4℃或?c20℃保存备用。
10.吸取适量样品于genequant上检测浓度和纯度。
单细胞rna测序
单细胞rna测序也称scrna-seq。通常而言，一般的组织细胞rna-seq实验会产生1000万个读数，如果一个基因的频率超过50rpkm，即每百万读数中每千个碱基中超过50个，这一基因即被认为有表达。泊松分布下，1kb长的基因有超过500个读数和4%的小变异系数，即cv值；哺乳动物细胞通产含有200，000个mrna，因此至少要用50个单细胞一起才能到达小cv值；考虑到逆转录的效率和环境干扰等因素，为得到准确的表达和细胞种类的识别，需要使用的细胞数量实际要更多。
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