湖北染色体原位杂交-贝科新肽(商家)

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原位杂交技术方法大致可分为:1.杂交前准备,包括固定、取材、玻片和组织的处理,如何增强-探针的穿透性、减低背景染色等;2.杂交;3.杂交后处理;4.显示visualization:包括性自显影和非性标记的显色。固定原位杂交组织化学技术在固定剂的应用和选择上应-到三个方面:保持细胞结构,限度地保持细胞内dna或rna的水平;使探针易于进入细胞或组织。dna是比较稳定的,mrna是相对稳定的但易为酶合成和降解。rna却绝然不同,非常容易被降解。因此,染色体原位杂交,对于dna的定位来说,固定剂的种类和浓度并不十分重要。相反,在rna的定位上,如果要使rna的降解减少到低限度,那么,不仅固定剂的种类浓度和固定的时间十分重要,而且取材后应尽快予以冷冻或固定。




原位杂交:

  原位杂交是指用特定探针定位、检测dna、rna的一种有效的实验方法,通过把特点序列客隆到特殊载体上,通过转录酶反转一条天然的rna探针,将探针和切片样品进行杂交,通过一系列显色方法,来确定rna或者dna表达区域;本中心原位杂交探针采用的是第高辛和生物素标记,灵敏度和同位素相当。 我们采用roche标记及显色试剂盒,gish/ish/fish按照探针进行收费,每个试剂盒每条探针可以杂交60-80张玻片,收费为1万5千元,gish杂交因需要加抗淬灭剂每条探针收费为1万9千元。量-!






dna 探针为原位杂交提供较高的灵敏度。与rna探针相比,dna探针与靶mrna 分子的杂交强度较弱,因此在杂交后的洗涤中不应使用甲醛。

探针特--。如果已知细胞中mrna或dna的确切核苷酸序列,则可据此设计高度的互补探针。如果超过 5% 的碱基对不互补,那么探针只能与靶序列发生轻度杂交。这意味着,探针更容易在洗涤和检测步骤中被洗去,可能无-确检测。





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