透射电镜自噬小体检测
胰酶---，---实验，收集作用后的细胞，离心，山西细胞，先将细胞块固定在2.5%成二醛和0.1%的pbs溶液中保存在4c中过夜。
再用---梯度脱水，接下来用环氧树脂浸透并切成薄片。随后超薄切片用铜网固定，后用重金属---双氧-和柠檬酸铅染色。通过tem分析凋亡细胞内超微结构变化，拍照保存。
贴壁细胞:先倒出培养液，采用胰蛋白酶---或者用细胞刮(会产生碎屑)刮下:带培养液进行离心，100-1500/mim 5 10min。离心完毕倒出培养液。管底的细胞团不要打散， 沿管壁倒入适量(一般为材料体积的5-10倍)的2.5-3.5%成醒固定液，固定约1h-2h. 也可在4c冰箱过夜。
选择实验外包公司需要注意哪些事项？
技术支持
尽量有专门的技术负责对接项目，或者有技术服务群。随时沟通项目问题，定期-实验进展。这样能把控实验进度，结果数据有疑问也可以交流，不要实验做完就没人管了。
实验数据
明确提供实验原始数据、原始图片，并有保密协议不外传数据和客户的信息。-实验结果的完整性、唯独性、真实性。这也是找实验外包很关心的原则。另外结果尽量有实验报告形式，包含所用材料、实验步骤和结果统计分析，方便写文章时直接使用。另外实验都是有不确定性的，如果外包公司能-一定能做出预期的结果，那多半是不-的。做实验不怕出问题，-外包公司会负责到底，有问题反馈再处理就好。
细胞实验介绍——慢---建立稳转细胞系
慢---包装：公司使用3质粒慢---包装系统，慢---系统使用plko.1-egfp、pspax2、pmd2.g，过表达慢---系统使用plvx-acgfp、pspax2、pmd2.g三质粒系统，将质粒混匀后使用磷酸钙转染方法转染至hek293t细胞中，培养48h后，收集上清。使用genecopo公司慢---颗粒纯化试剂盒将慢---纯化。纯化后留取部分检测---滴度，其余---冻存于-80℃冰箱中。
滴度检测：将---颗粒使用梯度稀释，分别293t细胞，72h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光表达情况。根据细胞荧光量计算---滴度。
细胞：在---前---对细胞进行计数，细胞毒性实验，接种约10000个细胞于12孔板中，培养过夜后使用无培养基稀释---，加入12孔板中对细胞进行，---数量根据细胞的moi加入若无moi，需做---梯度：1，5，10，50，100 5个梯度对细胞，6h后去除含---溶液，加入完全培养基细胞培养，培养48h后，在荧光显微镜下观察细胞荧光强度。同时加入puromycin对细胞筛选，筛选约2周时间。细胞筛选好后，使用定量pcr和western blot检测目的基因的稳定表达情况。
实验流程：慢---质粒构建-hek293t细胞培养-质粒转染293t细胞----收集----纯化----滴度检测-细胞-稳转细胞筛选-稳转细胞鉴定
结果示例：
图 a ---滴度检测；b 目的细胞---效果图
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