洋葱亚细胞定位培养-思特进科技发展公司(图)

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2021-4-13  
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武汉思特进科技发展有限公司成立于2007年,是一家以实验技术研发、实验产品研发、日化产品研发、实验项目承接为一体的-公司;公司实验中心有分子生物学平台、细胞平台、光镜平台、植物组培平台、原---白表达平台、日化产品生产平台;可以开展各类动、植物、---、细胞等生物实验。




canz是can(calcineurin)基因的正义表达基因,是在真核生物中存在的一个ca2+及cam依赖的ser/thr蛋---酸酶,它包括一个催化亚基calcineurin a和一个ca2+结合亚基calcineurin b,其催化亚基calcineurin a活性受cam调节。本实验在筛选再生体系基础上,利用带有信号肽和cam结合肽的载体,以农为媒介将can基因导入中,预期过表达的融合蛋白将会被分泌到细胞外并与质外体cam相结合,抑制质外体cam的功能,从而构建出质外体cam的反义植株,观察质外体cam反义植株的表型改变,为进一步开展cam在植物生长发育过程中的功能研究提供基础。 研究结果如下: (1)以14-16d叶片为外植体,以ms为基本培养基,通过附加配方对比,洋葱亚细胞定位培养,筛选出适合材料再生的培养基配方:ms+iaa 0.5mg·l-1+6-ba 1.5mg·l-1为芽分化的培养基,1/2ms+naa0.1mg·l-1为生根培养基。 (2)用kan进行叶片抗性筛选。当kan浓度小于50mg·l-1时,叶片能正常分化出芽;当kan浓度为75mg·l-1时,叶片大多数白化;当kan浓度超过100mg·l-1时,芽分化停止。所以,以kan浓度100mg·l-1为叶片分化芽抗性筛选的临界浓度;而培养物根对较为敏感,kan 50mg·l-1为筛选临界值。


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几丁质酶(chitinase)是一种能够将几丁质水解成n----葡糖胺的糖苷酶,广泛存在于植物细胞中,是------反应体系的重要组成部分.该文深入分析了1种三七几丁质酶基因pnchi1的功能.构建pnchi1的亚细胞定位载体,转入洋葱表皮细胞中瞬时表达,在激光扫描共-显微镜下发现pnchi1定位于细胞壁中.构建pnchi1的原核表达载体,-并纯化获得重组蛋白,体外平板---实验结果显示pnchi1原核重组蛋白对尖孢镰刀菌、茄腐镰刀菌、轮枝镰刀菌3种三七根腐病菌的菌丝生长具有很强的抑制活性.采用反向遗传学技术验证pnchi1的功能,通过根癌农介导将pnchi1转入中过量表达.qrt-pcr分析结果表明pnchi1在t2代---中大量表达,同时叶片接种实验显示pnchi1---对茄腐镰刀菌的抗性增强明显.结论:pnchi1是定位于细胞壁的几丁质酶,体外能抑制几种三七根腐病---,在过表达大大提高了对茄腐镰刀菌的抗性,推测pnchi1是三七中参与根腐病---反应的重要抗病基因.


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紫花苜蓿(medicago sativa l.)在范围内分布广泛,是-的高产牧草,茎叶中含有丰富的蛋白质,被誉为“牧草”。苜蓿不仅营养丰富,其次生代谢产物苜蓿皂甙(alfalfa s-ins)近年来被认为是苜蓿的---功能的主要来源:具有-的降胆固醇、---,还有、、、杀虫等---及生物活性。目前,对于苜蓿的开发利用主要集中于提高家畜饲料营养价值及改良饲料加工等方面,然而苜蓿皂甙等次生代谢产物却被研发成专门的产品或者添加剂应用于生产实践中。本文将对紫花苜蓿苜蓿皂甙合成途径中关键酶基因进行筛选、和功能分析,为苜蓿品质改良及选育新品种提供新的理论依据。
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