原位杂交-思特进

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2021-6-5  
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原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行-特---检测,与免6疫组化技术的结合应用,能将dna、mrna和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年pardue和gall将放9射性标记的探针直接应用于纯化-的杂交,此后得益于分子克6隆技术的发展,及不同探针标记系统和检测系统的应用,---增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。



间接标记的方法中应用了报告分子标记的探针,报告分子通过亲和酶促的方法进行显色。常用的报告分子如地高6辛,生物素。结合地高6辛抗6体或链霉亲和素上耦联的酶系统进行间接的底物反应检测。地高6辛标记-的历史可追溯到1987年,由于地高6辛是洋地黄的花和叶---有的成分,检测时使用的地高6辛抗6体不会结合于其他的生物分子。这是相较于生物素标记系统的优势。地高6辛抗6体上可耦联碱性磷酸酶、---化酶,及荧光分子和胶体金等,根据不同的应用需求,呈现高信噪比的---结果。但需注意,由于引入了免6疫检测反应,在放大检测灵敏度的同时,应注意样品内源性酶的灭活,以降低检测背景。

通过不同标记方法的联合应用,还可在同一样本中实现染色体不同区域或细胞样本中不同rna序列的多重检测。





总的来说,随探针浓度增加,杂交率也增加。另外,在较窄的范围内,随探针浓度增加,敏感性增加。依我们的经验,要获得较满意的敏感性,原位杂交,膜杂交中32p标记探针与非放0射性标记探针的用量分别为5~10 ng/ml和25~1000ng/ml,而原位杂交中,无论应用何种标记探针,其用量均为0.5~5.0μg/ml。探针的任何内在物理特性均不影响其使用浓度,但受不同类型标记物的固相支持物的非特异结合特性的影响。



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