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疏水层析介质-纳微科技(在线咨询)-层析介质

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2021-8-19  
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以纯化溶瘤---为例,由于其在生产过程中存在宿主蛋白等杂质,纯化前 sec测试纯度为6.5%。纯化采用两种基质相同的介质,其表面化学功能也很一致,主要区别是前者是无孔实心的层析介质,而后者是传统的多孔层析介质。层析纯化的方法是阴离子交换吸附然后梯度洗脱bind-elute模式。从层析图谱可以看出,在洗脱及cip过程中无孔介质洗脱杂质更小,峰值---,意味着上样过程中结合的杂质会更少,有利于表面结合的---分子纯化。通过对层析洗脱液sec纯度分析比较,发现用传统的多孔层析介质实验得到的---样品纯度为54%图 ,而用无孔的同类型介质实验得到的---纯度达到接近90%图 。






   之三:高度交联聚丙l---酯基球替代软胶或低交联的聚丙l---酯基球    高机械强度介质不仅可以耐受更高流速、更高压力、粘度样品,还可以装更高的柱床,以增加抗l体批处理量、提高抗l体生产效率、减少设备投资、减少厂房占用面积。因此纳微protein a 介质是选择高度交联的聚丙l---酯基球,与市场上以琼脂糖或低交联度聚丙l烯l酸酯为基球生产的protein a 介质相比具有溶胀系数小、压缩比例低、而且机械性能强。实验证明 unimab在2公斤装柱压力下,其柱床压缩比例只有5%,而无论是ge 生产的以琼脂糖为基球还是tosoh 生产的低交联聚合物为基球的protein a 介质压缩比例往往超过15%。





分离纯化抗l体的目的。野l生型protein a蛋白是金黄色葡l萄球菌细胞壁锚钉蛋白。三维空间上,抗l体fc端ch2-ch3区域与protein a蛋白b结构域上两条反相平行的α螺旋结构相互结合。因此protein a与抗l体分子---是与igg1、igg2、igg4有特---结合,protein a亲和捕获,使得抗l体分子与发酵液中不具fc端结构的杂质如宿主蛋白与-等有效分离,疏水层析介质,进而达到纯化目的。protein a 亲和层析介质是通过把proteina 配基偶联到微球介质上制备而成的。因为protein a配基与目标抗l体的作用的专一性,层析介质,因此亲和层析的分离纯化工艺和方法与抗l体样品杂质含量和种类多少影响不大,使用protein a 介质一步纯化目标抗l体就可以达到95%以上纯度,单分散层析介质,回收率达到90%以上。亲和纯化效率也基本不受杂质多少影响,而其它分离模式如离子交换,疏水,分子筛等的分离工艺方法及效率大多取决于与目的蛋白同时存在的杂质种类和含量。因此,只要样品杂质不同,即使是纯化同样的目标生物分子,采用的分离工艺和方法就不同。以重组---分离纯化为例,不同厂家虽然生产的是同一目标---,但采用分离纯化方法完全不一样,主要原因就是每家生产的---杂质组成和含量不一样,因此需要不同的纯化工艺。而比---分子量,结构更复杂的抗l体基本可以采用标准化的三步曲,主要原因就是protein a 亲和介质的出现---简化抗l体的分离纯化工艺,但protein a 价格昂贵让抗l体生产厂家爱恨交加。
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