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分子生物学检测
分子生物学作为现代生物技术中zui为---的实验手段之一,已经广泛渗透到生命科学的各个领域,在基础研究、医l疗诊断等领域均起到了非常重要的作用。
借助的技术优势,英瀚斯生物特配备了高l效的仪器设备,如slan 48p 荧光定量pcr检测系统、pcr仪、电泳仪、冷冻离心机、高速离心机等。目前公司可为您提供反转录pcr、荧光定量pcr、凝胶电泳迁移率等检测服务,---缩短您的实验周期、降低您的实验成本。
分子与质粒载体构建
实验原理
外源dna与载体分子的连接就是dna重组,这样重新组合的dna叫做重组体或重组子。重组的dna分子是在dna连接酶的作用下,pcr检测,有mg2+、atp存在的连接缓冲系统中,将分别经酶切的载体分子与外源dna分子进行连接。dna连接酶有两种:t4噬菌体dna连接酶和大肠dna连接酶。两种dna连接酶都有将两个带有相同粘性末端的dna分子连在一起的功能,而且t4噬菌体dna连接酶还有—种大肠连接酶没有的特性,即能使两个平末端的双链dna分子连接起来。但这种连接的效率比粘性末端的连接效率低,一般可通过提高t4噬菌体dna连接酶浓度或增加dna浓度来提高平末端的连接效率。
t4噬菌体dna连接酶催化dna连接反应分为3步:,fish检测,t4dna连接酶与辅助因子atp形成酶—amp复合物;然后,酶—amp复合物再结合到具有5磷酸基和3---切口的dna上,使dna腺苷化;后产生一个新的磷酸二酯键,实时荧光定量pcr,把切口封起来。
dna重组的方法主要有粘端连接法和平端连接法,为了防止载体本身的自连,可以通过(牛碱性磷酸酶)cip处理克服。
连接反应的温度在37℃时有利于连接酶的活性.但是在这个温度下,粘性末端的氢键结合是不稳定的。因此人们找到了一个折中温度,即12-16℃,北京pcr,连接12-16h(过夜),这样既可大限度地发挥连接酶的活性,又---到短暂配对结构的稳定。
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