1.细胞贴壁少的问题:教科书中说明冻存细胞解冻时1ml细胞液要加10ml-15m培养液,而在我的试验中的经验总结为培养基越少细胞越容易贴附。
2.复苏细胞分装的问题:试验中我的经验总结为复苏1管细胞一般可分装到1-2只培养瓶中,分装过多,细胞浓度过低,不利于细胞的贴壁。
3.加培养基的量放入问题:这个量的多少的把握主要涉及到的问题是dmso的浓度,从如果你加培养基的太少,那么dmso的浓度就会比较大,就会影响 细胞生长,从以前的资料来看,dmso的浓度在小于0.5%的时候对一般细胞没有什么影响,还有一个说法是1%。所以如果你的冻存液的浓度是 10%dmso的话那么加10ml以上的培养基就恰好稀释到了无害浓度。
目前主要有两种见解。一种是解冻后的细胞悬液直接吹打均匀后分装到培养瓶中进行培养,第二天换液。因为离心的目的是两个,去除 dmso,去除---,200-074-400冻存袋多少钱,这个是标准流程,但对一般人来说,把握不好离心转速和时间,转的不够沉底的少,细胞就全被扔掉了,转过了会受压过大, 。此外在操作过程中容易污染,所以不。另一种说法为细胞悬液中含有二---dmso,dmso对细胞有一定的毒副作用,所以须将离心后的液 体前倒净,且一定倒干净。我在试验中按照常规的离心分装的方法进行复苏,延庆冻存袋,结果无有异常。
可用于细胞在-196℃液氮中的存储和转运。所有冻存袋都是无菌即用型包装。冻存袋对于大量细胞的冻存非常方便,但使用过程中还有些小地方需要注意。较大冻存体积的是参照冻存袋平放,200-074-400冻存袋,液体厚度8mm时液体的体积。增加冻存液体的量,冻存袋到是能装下,但细胞复苏的时候就麻烦了,液体厚度太大,融化所需时间太长,细胞活率要受很大的影响啊!
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