lncrna测序
长链非编码rnaslong non-coding rnas，lncrnas一般是指长度大于200 nt的rna，位于细胞核内或胞浆中，不参与蛋白质编码功能，以rna形式在多种层面上表观遗传调控、转录调控以及转录后调控等调控基因的表达水平，在生命活动中具有重要作用。
长链非编码rna测序long non-coding rna sequencing，lncrna-seq是一种使用特定方法降低样本中rrna 的丰度，对富集到的 rna进行---构建，再对高通量测序仪产出的数据进行信息分析的研究方法。lncrna-seq可---获得样本中全部的lncrnas信息，pcr，对lncrnas的类别、功能进行的深入分析，从而快速准确地获得与特定生物学过程例如发育、---等相关 lncrna信息。
逆转录---构建及包装
逆转录---retrovirus是一类rna---。在逆转录酶的作用下，以---rna为模板合成cdna再通过dna、转录、翻译等过程形成---颗粒。逆转录---表达系统是一种新的重组蛋白表达系统，由逆转录---载体、辅助载体表达---包装需要的蛋白质和包装细胞系组成。逆转录---载体在外源基因表达、基因沉默、、生物制药等得到广泛的应用。逆转录---载体主要优点：转染范围广，可以各种细胞类型，转入的外源基因可完全融合，对细胞率高，细胞不产生病变，可建立细胞系长期持续表达外源基因。
逆转录---载体系统共有两部分组成：包装细胞系和缺陷---本身。在逆转录---载体中，去除了正常的蛋白编码序列而保留了和包装信号，通过分子技术将目的基因插入此载体上，而包装细胞系能提供---载体包装成---粒子所需的结构蛋白。当重组---载体导入包装细胞后，缺陷---载体和包装细胞的互补作用共同完成---装配，该---颗粒可其它宿主细胞，pcr检测，此时目的基因进入该细胞并整合到细胞基因组中，导致插入序列在宿主细胞中表达，产生目的蛋白。宿主细胞不能像包装细胞那样为缺失结构基因的逆转录---提供结构蛋白，因而在宿主细胞内不会产生新的毒颗粒，---了该载体在生物制品领域的生物安全性问题。
通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
收集细胞后装载探针：按照1：1000用无培养液稀释dcfh-da，使终浓度为10微摩尔/升。细胞收集后悬浮于稀释好的dcfh-da中，细胞浓度为一百万至二千万/毫升，pcr，37℃细胞培养箱内孵育20分钟。每隔3-5分钟颠倒混匀一下，使探针和细胞充分接触。用无细胞培养液洗涤细胞三次，以充分去除未进入细胞内的dcfh-da。直接用活性氧阳性对照及自己感兴趣的---细胞，荧光定量pcr，或把细胞等分成若干份后---细胞。通常活性氧阳性对照在---细胞20-30分钟后可以---提高活性氧水平。
2.、检测
对于原位装载探针的样品可以用激光共---显微镜直接观察，或收集细胞后用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测。
对于收集细胞后装载探针的样品可以用荧光分光光度计、荧光或流式细胞仪检测，用激光共---显微镜直接观察也可以。
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