镍琼脂糖凝胶

北京博尔西科技有限公司为您提供镍琼脂糖凝胶。提示：本公司全部产品均为科研实验使用试剂，非---用途、非食品、非体外诊断试剂，不可用于动物及人体！
镍-琼脂糖凝胶ffida
ni-berpharose ff-ida
1. 产品介绍
镍-琼脂糖凝胶ff以琼脂糖微球为基质，活化偶联亚---二---ida，之后螯合ni2+。ida是金属螯合层析中常用的配体，和次氮基三---nta相比，ida具有亲和力强、载量高、可再生重复使用等优点。
镍-琼脂糖凝胶ff主要用于纯化含有组氨酸标签his-tag的重组蛋白。组氨酸标签中的咪唑环同过渡金属ni2+形成稳定的配位键，能特异、牢固和可逆地吸附在固定有ni2+的基质上，可通过增加咪唑浓度对重组蛋白进行竞争洗脱。

2.规格
1ml预装柱、5ml预装柱、10ml预装柱、20ml、100ml、500ml

3.产品性能
性能 指标
基质 6%琼脂糖微球
配基 ni2+
载量 ***40mg his标签蛋白/ml
粒径 45-165μm
---流速 50-300 cm/h
耐压 0.3mpa
工作温度 4-40℃
ph稳定范围:正常/脱镍 5-12/3-14
储存缓冲液 20%---
储存温度 4-8℃

4.纯化流程
平衡
镍-琼脂糖凝胶ff柱用2-5个柱体积的初始缓冲溶液进行平衡。
建议流速为100 cm/h。
上样
1样品一般溶解于ph6-8的初始缓冲液中。提高上样缓冲液的ph值可以增大载量。
2缓冲液中不能含有edta和柠檬酸盐，同时---避免巯基---、dtt等还原剂。
3常用缓冲液有10-100 mm磷酸钠缓冲液、20-200 mm tris-hcl缓冲液等。
4缓冲液中一般要加入0.15-0.5 m的nacl以消除离子交换作用。
5初次使用镍-琼脂糖凝胶ff时，---使用50 mm pbs50 mm nah2po4、0.5 m nacl、ph 7.4作为初始缓冲液。
洗脱
1增加咪唑浓度进行洗脱是镍-琼脂糖凝胶ff常用的洗脱方法。
2咪唑为碱性，相应缓冲液配制后需要用hcl调节ph值。
3初次使用镍-琼脂糖凝胶ff时，如不确定洗脱需要的咪唑浓度，---在初始缓冲液中分别加入10 mm、20 mm、50 mm、100 mm、200 mm、500 mm咪唑，浓度从低
到高分别洗脱和收集重组蛋白，之后通过sds-page电泳等方法鉴定洗脱结果。
4有条件的可以进行咪唑梯度线性洗脱以确定较佳的洗脱条件。

洗脱方法：
1降低ph洗脱：大多数蛋白在ph4-6会被洗脱下来也可以在ph 3~4，缓冲液可以是---钠、柠檬酸和磷酸盐缓冲体系。
2竞争性洗脱：线性增加或一步增加同金属离子有亲和力的竞争物质的浓度如0-0.5m咪唑、0-50 mm组氨酸、0-2m nh4cl。梯度洗脱---在起始缓冲液的恒定ph值下进行。
3螯合剂洗脱：edta、egta等螯合剂可同金属离子产生作用力，导致蛋白被洗脱下来。此法不能分离不同的蛋白，还会影响蛋白的吸附，导致融合蛋白无法挂柱。
注：降低ph洗脱和螯合剂洗脱会使得金属离子脱落，下次使用前需要重新螯和金属离子。常用的方法为竞争性洗脱。
上述洗脱方法，均须在缓冲液中加入150 -500mm的nacl以消除离子交换作用。

5.再生、清洗、保存
凝胶再生
1多次使用后或需要更换螯合的金属离子时，必须将凝胶脱镍再生。脱镍方法：用5-10个柱体积的蒸馏水淋洗柱子，再用5-10个柱体积的100 mm edta淋洗柱子，---用2-3个柱体积的0.5 m nacl洗掉残留的edta。
2多次使用的柱子脱镍后一般需要进行清洗。清洗方法：用0.1-1.0 m naoh反向清洗柱子，50 cm/h保持1-2 h，能去除结合强的杂质，同时也能去除热源。
3清洗后需要重新螯合金属离子。螯合方法：用2-5个柱体积的蒸馏水充分平衡脱镍后的柱子，用0.1-0.3 m金属盐溶液过柱5-10个柱体积以螯合金属离子，之后用5-10个柱体积的蒸馏水淋洗以去除未螯合的金属离子。
在位清洗
1去除因离子交换作用吸附的蛋白：使用1.5m nacl 溶液接触时间为10-15 分钟清洗，然后，再使用去离子水清洗10 个柱体积。
2去除强疏水性蛋白和脂质等：通过使用30%---醇清洗5-10 个柱体积，接触时间为15-20 分钟可以去除此类污染物。 然后，再使用10 倍柱体积的去离子水清洗。也可以选择使用含有去污剂的酸性或碱性溶液， 清洗填料2 倍柱体积。例如，含有0.1–0.5% 非离子去污剂的0.1 m ---溶液，接触时间 为1–2 小时。去污剂处理后，需要使用70%的---清洗5 个柱体积，以---去除去污剂。 ---使用10 倍柱体积的去离子水清洗。
3除去蛋白沉淀、疏水性蛋白：参照凝胶再生步骤。
6.注意事项：
1)使用时---柱子和缓冲液的温度一致，避免柱床内产生气泡，影响纯化效果。
2)本产品保存条件为20%---，4-8℃。
3) 2-25℃,常压,避光运输
4仅供科研实验使用
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