-CHTB-65MEWO细胞

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细胞名称: ---c htb-65(mewo)细胞, mewo细胞, 人恶性---瘤细胞
种属来源: 人
组织来源: 皮肤
特      征: 恶性---瘤
细胞形态: 上皮细胞样
生长特性: 贴壁生长
培养基:      rpmi-1640，90%；fbs，10%。
生长条件: 气相：空气，95%；---，5%; 温度：37 ℃, 
传代方法: 1：2至1：6，每周2次。
冻存条件: 90% 完全培养基+10% dmso，液氮储存
支原体检测: 阴性
安全等级: 1
str:
amelogenin: x,y
csf1po: 12
d13s317: 8,9
d16s539: 10,12
d5s818: 12,13
d7s820: 10,12
tho1: 7,9
tpox: 8,10
vwa: 15


接受后处理
1) 收到细胞后，请检查是否漏液 ，如果漏液，请拍照片发给我们。


2) 请先在显微镜下确认---c htb-65(mewo)细胞生长 状态，去掉封口膜并将t25瓶置于37℃培养约2-3h。


3) 弃去t25瓶中的培养基，添加 6ml本公司附带的完全培养基。


4) 如果细胞密度达80%-90%请及 时进行细胞传代，传代培养用6ml本公司附带的完全培养基。


5) 接到细胞次日，请检查细胞是 否污染，若发现污染或---污染，请及时与我们取得联系。


培养操作
1复苏细胞：将含有 1ml 细胞悬液的冻存管在 37℃水浴中迅速摇晃解冻，加 入 4ml 培养基混合均 匀。在 1000rpm 条件下离心 4 分钟，弃去上清液，补 加 1-2ml 培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培 养过夜或将 细胞悬液加入 10cm 皿中，加入约 8ml 培养基，培养过夜。第二天换液并 检查细胞密度。


2细胞传代：如果---c htb-65(mewo)细胞密度达 80%-90%，即可进行传代培养。


1. 弃去培养上清，用不含钙、镁离子的 pbs 润洗细胞 1-2 次。


2. 加 1ml ---液0.25%trypsin-0.53mm edta于培养瓶中，置于 37℃培 养箱中--- 1-2 分钟，然后在显微镜下观察细胞---情况，若细胞大部分 变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养 瓶后加少量培养基终止消 化。


3. 按 6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在 1000rpm 条件下离心 4 分 钟，弃去上清液，补加 1-2ml 培养液后吹匀。


4. 将细胞悬液按 1：2 比例分到新的含 8ml 培养基的新皿中或者瓶中。


3细胞冻存：待细胞生长状态---时，可进行细胞冻存。下面 t25 瓶为类；


1. 细胞冻存时，弃去培养基后，pbs 清洗一遍后加入 1ml 胰酶，细胞变圆 脱 落后，加入 1ml 含血清的培养基终止---，可使用血球计数板计数。


2. 4 min 1000rpm 离心去掉上清。加 1ml 血清重悬细胞，根据细胞数量加 入血 清和 dmso，轻轻混匀，dmso 终浓度为 10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存 1ml 细胞悬液，注意冻 存管做好标识。


3. 将冻存管置于程序降温盒中，放入-80 度冰箱，2 个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。



培养注意事项
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好，培养液是否有漏液、浑浊等现象，若有上述现 象发生请及 时和我们联系。


2. 仔细阅读细胞说明书，了解细胞相关信息，如细胞形态、所用培养基、血清比例、所 需细胞因子 等，---细胞培养条件一致。若由于培养条件不一致而导致细胞出现问 题，责任由客户自行承担。


3. 用 75%酒精擦拭细胞瓶表面，显微镜下观察细胞状态。因运输问题贴壁细胞会有少量 从瓶 壁脱落，将细胞置于培养箱内静置培养 4~6 小时,再取出观察。此时多数细胞均 会贴壁，若细胞仍不能贴壁请用台盼蓝 染色测定细胞活力，如果证实细胞活力正常， 请将细胞离心后用新鲜培养基再次贴壁培养；如果染色结果显示细胞无活 力，请拍下 照片及时和我们联系，信息确认后我们为您再免费寄送一次。


4. 静置细胞贴壁后，请将细胞瓶内的培养基倒出，留 6~8ml 维持细胞正常培养，待细 胞汇 合度80%左右时正常传代。


5. 请客户用相同条件的培养基用于细胞培养。培养瓶内多余的培养基可收集备用，细胞 传代时可以 一定比例和客户自备的培养基混合，使细胞逐渐适应培养条件。


6. 建议客户收到细胞后前 3 天各拍几张细胞照片，记录细胞状态，便于和我司技术 部 沟通交流。由于运输的原因，个别敏感细胞会出现不稳定的情况，请及时和我们联 系，告知细胞的具体情况，以便我们 的------回访直至问题解决。


7.该细胞仅供科研使用。

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