通用染料法荧光定量PCR试剂盒使用步骤

通用染料法荧光定量pcr试剂盒稀释pcr阳性对照以10e2-10e7拷贝/μl这6个10倍稀释度为例

1. 注意：由于标准品浓度非常高，因此下列稀释操作一定要在独立的区域进行，千万不能污染样品或本试剂盒的其他成分。为增加产品稳定性和避免扩散传染*病原，本产品不提供活体样品做阳性对照，只提供可以直接使用的dn*片段作为阳性对照。

2. 标记6个离心管，分别为7，6，5，4，3，2。

3. 用带芯枪头分别加入45 μl荧光pcr---模板稀释液用带芯枪头，下同。

4. 在7号管中加入5 μl 1×10e8拷贝/μl 的阳性对照，充分震荡1分钟，得1×10e7拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。

5. 换枪头，在6号管中加入5 μl 1×10e7拷贝/μl 的阳性对照(上步稀释所得)，充分震荡1分钟，得1×10e6拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。

6. 换枪头，在5号管中加入5 μl 1×10e6拷贝/μl的阳性对照到5号管中，充分震荡1分钟，得1×10e5拷贝/μl的阳性对照。放冰上待用。

7. 重复上面的操作直到得到6个稀释度的阳性对照。放冰上待用。

二、样品dna的制备

8. 如果有n个样品，必须设置n+2个提取，多出的一个是pc样品制备阳性对照，一个是nc样品制备阴性对照。可以用10μl上步制备的pcr阳性对照的第4号浓度为1×10e4 拷贝/μl，10μl相当于1万拷贝或第5号浓度为1×10e5 拷贝/μl，10μl相当于10万拷贝再加上一定量的水使总体积跟每次制备要求的体积一样，以此作为pc。另外用水作为nc。如果每次制备需要200μl样品，则pc和nc的体积也必须是200μl。

9. 用自选方法纯化样品的dna，本试剂盒跟市场上大多数---dna提取试剂盒兼容。

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