鲤春-SVCV-试剂盒检验方法

鲤春---(svcv)---试剂盒检验方法
1.标本、对照品的-裂解处理
用商品化取得-qixiexukezheng的rna提取试剂盒处理标本，具体操作参见该试剂盒说明书。
或用trizol法提取，方法如下：取100?l样品置于1.5ml 离心管中，加入300?l裂解液trizol，再加入100， 混匀器上振荡混匀5sec或颠倒混匀15次； 13000rpm离心15min， 吸取上层液体，加入等体积yibingchun，颠倒混匀室温静置10min， 13000rpm离心10min，轻轻倒去上清；加入700?l 75%yichun，颠倒洗涤，13000rpm离心5min，轻轻倒去上清，倒置于吸水纸上，弃尽液体或4000rpm离心5sec，将管壁上的残余液体甩到管底部，用微量加样器尽量吸干液体，加入20?l depc-h2o溶解rna。
2.试剂配制
取n×19?l --荧光pcr检测混合液与n×1?l rt-pcr酶n为反应管数,振荡混匀数秒, 3000rpm离心数秒。
3.加样取上述混合液20?l置于pcr管中，然后将样品-提取液、depc-h2o、阳性对照品各5?l分别加入pcr管中，盖好管盖，立即进行pcr扩增反应。
4. pcr扩增反应管置于定量荧光pcr仪上，循环参数设置：
45℃×10min; 95℃×15min;循环一次，再按95℃×15sec***60℃×60sec，循环45次;单点荧光检测在60℃，反应体系为25?l。
荧光通道检测选择：选用fam通道。

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