腺-D型探针法荧光定量PCR试剂盒参加PCR反应的物质

     腺---d型探针法荧光定量pcr试剂盒参加pcr反应的物质主要有五种即引物、酶、dntp、模板和mg2+
     
     引物：引物是pcr特---反应的关键，pcr 产物的特---取决于引物与模板dna互补的程度。理论上，只要知道任何一段模板dna序列， 就能按其设计互补的寡核苷酸链做引物，利用pcr就可将模板dna在体外大量扩增。设计引物应遵循以下原则：
     
     引物长度： 15-30bp，常用为20bp左右。
     
     引物扩增跨度： 以200-500bp为宜，特定条件下可扩增长至10kb的片段。
     
     引物碱基：g+c含量以40-60%为宜，g+c太少扩增效果不佳，g+c过多易出现非特异条带。atgc*随机分布，避免5个以上的嘌呤或---核苷酸的成串排列。
     
     避免引物内部出现二级结构，避免两条引物间互补，---是3端的互补，否则会形成引物二聚体，产生非特异的扩增条带。
     
     引物3端的碱基，---是末及倒数第二个碱基，应严格要求配对，以避免因末端碱基不配对而导致pcr失败。
     
     引物中有或能加上合适的酶切位点， 被扩增的靶序列*有适宜的酶切位点， 这对酶切分析或分子---很有好处。
     
     引物的特---：引物应与-序列数据库的其它序列无明显同源性。
     
     引物量：每条引物的浓度0.1～1umol或10～100pmol，以*引物量产生所需要的结果为好，引物浓度偏高会引起错配和非特---扩增，且可增加引物之间形成二聚体的机会。

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