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胎牛血清使用方法:在细胞培养过程中,经常加入5%-20%的胎牛血清,常使用的澳洲胎牛血清浓度是10%。高浓度的血清可能改变细胞的基因表达谱,影响后续实验的结果,我们在实验中使用10%的澳洲胎牛血清培养293t细胞,------好。但是有些细胞也会使用5%的gibco fbs或者20%的澳洲胎牛血清,要根据具体 细胞选择合适的澳洲胎牛血清浓度。
细胞培养中常见的污染情况总结如下:
1、---:---在普通倒置显微镜下为黑色细沙状,根据感ran---的不同,可有不同的外形,培养液一般会浑浊变黄,对细胞生长影响明显。
仔细检查一下器皿的---情况,是否在高压---时放气时间---,压力---!尤其是和储存培养液接触的移液管等物品,连续两次污染的话有可能造成储存液污染,---要注意!下次使用前检查一下培养液是否存在浑浊的现象!可在培养液中加相应的抗生su处理。
2、霉菌:培养液是清亮的,倒置显微镜下无杂质,37度孵箱培养2-3天,仍清亮,但出现絮状杂质,镜下可见呈细丝状的团状漂浮物,可看到明显的菌丝,细胞仍可生长,但时间长之后,细胞的活力状态变差,用---铜溶液擦拭co2孵箱内,再把水盘里也加上饱和量的---铜。或者在培养箱的托盘加入饱和的消------二钠高盐液体,可以防止霉菌污染。
抗体保存注意事项:大部分抗体的运输条件:一般的运输过程需要1-2 周的时间,所以是在4 度的条件下来完成的。4 度运输zui主要的目的是为了避免反复冻融对抗体活性的损害(如果使用干冰运输,那么收到时抗体是冻起来的,为了分装就需要解冻。这就多了一次冻融的过程)。所以运输过程中避免干冰运输!特殊抗体的保存条件:1. 酶联抗体:---保存在4 度,避免冻起来。否则会导致酶活性的下降或者丧失。2. 偶联抗体:所有偶联抗体---在棕色管中或使用锡箔纸避光保存。尤其是荧光抗体,对光---敏感,因此在所有的实验阶段也是要避光操作的!
血清解冻后发现有絮状沉淀物出现,该如何处理?血清中沉淀物的出现有许多种原因,但zui普遍的原因是由于血清中脂蛋白的变性所造成,血纤维蛋白(形成凝血的蛋白之一)在血清解冻后,也会存在于血清中,亦是造成沉淀物的主要原因之一。但这些絮状沉淀物,并不影响血清本身的品质。 若您欲去除这些絮状沉淀物,可以将血清分装至无菌离心管内,以400g稍微离心,上清液即可接着加入培养基内一起过滤。我们不建议您以过滤的方法去除这些絮状沉淀物,因为它可能会阻塞您的过滤膜。
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