天津液相分离-,武汉赛尔夫科技公司

反相色谱(rpc)是指利用非极性的反相介质为固定相，极性有机溶1剂的水溶液为流动相，根据溶质极性(疏水性)的差别进行溶质分离与纯化的洗脱色谱法。与hic一样，rpc中溶质也通过疏水性相互作用分配于固定相表面，但是，rpc固定相表面完全被非极性基团所覆盖，表现出-的疏水性。接通载气当色谱柱与进样口接好后，通载气,调节柱前压以得到合适的载气流速。因此，必须用极性有机溶1剂或其水溶液进行溶质的洗脱分离。溶质在反相介质上的分配系数取决于溶质的疏水性，一般疏水性越大，分配系数越大。当固定相一定时，可以通过调节流动相的组成调整溶质的分配系数。rpc主要应用于相对分子低于5000，-是1000以下的非极性小分子物质的分析和纯化，也可以用于蛋白质等生物大分子的分析和纯化。由于反相介质表面为-疏水性，并且流动相为低极性的有机溶1剂，生物活性大分子在rpc分离过程中容易变性失活，所以，以回收生物活性蛋白质为目的时，应注意选用适宜的反相介质。

色谱法，又称层析法。根据其分离原理，有吸附色谱、分配色谱、离子交换色谱与排阻色谱等方法。吸附色谱是利用吸附剂对被分离物质的吸附能力不同，用溶剂或气体洗脱，以使组分分离。常用的吸附剂有氧化铝、硅胶、聚---等有吸附活性的物质。固定相的不同也可以导致选择性发生变化，基柱、柱、c8柱、c18柱等的选择性有很大差异，一般应优先考虑c8柱、c18柱，然后是基柱，再次是柱。分配色谱是利用溶液中被分离物质在两相中分配系数不同，以使组分分离。其中一相为液体，涂布或使之键合在固体载体上，称固定相；另一相为液体或气体，称流动相。常用的载体有硅胶、硅藻土、硅镁型吸附剂与纤维素粉等。离子交换色谱是利用被分离物质在离子交换树脂上的离子交换势不同而使组分分离。常用的有不同强度的阳、阴离子交换树脂，流动相一般为水或含有的缓冲液。排阻色谱又称凝胶色谱或凝胶渗透色谱，是利用被分离物质分子量大小的不同和在填料上渗透程度的不同，以使组分分离。常用的填料有分子筛、葡聚糖凝胶、微孔聚合物、微孔硅胶或玻璃珠等，可根据载体和试样的性质，选用水或为流动相。

　注意事项：　　1、流动相均需色谱纯度，水用20m的去离子水。脱气后的流动相要小心振动尽量不引起气泡。　　2、柱子是非常脆弱的，做的方法，先不要让液体过柱子。　　3、所有过柱子的液体均需严格的过滤。　　4、压力不能太大，至好不要超过2000psi。

lc-100液相色谱系统可分为“高压输液泵”、“色谱柱”、“进样器”、“检测器”、“馏分收集器”以及“数据获取与处理系统”等部分。 　　lc-100液相色谱系统的技术动态：　　液相色谱和质谱连接，可以增加额外的分析能力，能够准确鉴定和定量像细胞和组织裂解液，-，血浆，尿液和口腔液等复杂样品基质中的微量化合物。保留时间由物质在色谱中的分配系数决定：tr=t0(1+kvs/vm)式中tr表示某物质的保留时间，t0是色谱系统的死时间，即流动相进入色谱柱到流-谱柱的时间，这个时间由色谱柱的孔隙、流动相的流速等因素决定。lc-100液相色谱系统提供了一些-的优势，包括：　　1、快速分析和流转所需的少样品准备。　　2、高灵敏度并结合可分析多个化合物能力，甚至可以跨越化合物的种类。　　3、高度，高分辨率鉴定和量化目标分析物。

lc-100液相色谱系统分析前准备：　　1、流动相前处理：将流动相经过0.45um的微孔滤膜过滤后，倒入流动相瓶中，放入超声波清洗器内震荡排气20分钟左右。　　2、流动相安装：将处理好的流动相放在储液托盘上，将对应通道的洗液管路分别放入流动相瓶中，盖好瓶盖并记好对应通道的流动相种类。但是并不是说一定要马上更换，还可以从实际实验效果看能否凑合使用。　　3、样品记录：将样品处理稀释后使用注射1器过滤头过滤后装入1.5ml样品瓶中大约三分之二，放入自动进样器的样品架上，并记录样品瓶位置以便设置批处理文件。　　4、色谱柱安装：打开柱温箱门，将色谱柱的出口端安装在色谱柱夹具上，在色谱柱上连接配管，在色谱柱出口端连接检测器入口端的蓝色peek管。　　5、检查清洗液：在rinse通道内放置50%甲1醇：水溶液；含有两根管路的通道内放置10%---1醇：水溶液。

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