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小粒径无孔单分散层析介质用于---的分离纯化

传统的层析介质填料都是多孔的微球，因为多孔微球材料的比表面积大，因而可以对一般生物分子分离提供较高的吸附载量。层析介质的孔径一般都小于2000?通常都小于100纳米。而很多---颗粒的粒径一般都大于20纳米，有的甚至都超过100纳米。由于体积排阻的原因，---颗粒无法扩散进入层析介质的孔内，因而在层析吸附---颗粒时只有介质微球的外表面可以利用，孔内表面积由于体积排阻的原因而无法吸附---颗粒。然而，---样品中的杂质分子一般都比---小，因而可以扩散进入层析介质孔内被吸附在里面。由于传统层析介质孔内表面积远远大于介质微球外表面积，杂质吸附往往由于孔内表面积的存在而非常---，吸附洗脱时杂质含量因而较高，---颗粒纯化---往往不理想。无孔层析介质由于没有大量只能容纳杂质进入而---颗粒无法扩散进入的内孔，---颗粒在介质外表面的层析吸附量虽然不会有明显变化，但样品中的杂质被层析吸附的量会---减少。因此经无孔层析填料层析洗脱后，---样品的分离纯度---提高。

孔径均一的整体柱用于分离纯化---

目前所使用的大部分层析柱都是填充柱，即将做好的微球介质填充到柱管中。这种用微球介质填充的层析柱容易放大，稳定，重复性好等优点，已被广泛地用于生物制药分离纯化，如抗l生素，---，抗l体等-分离纯化都是采用这种方法。但这种方法用于分离纯化---有局限性，主要是由于具有---孔结构且机械强度好的介质微球制备技术难度大。而整体柱由于具有孔径大、孔隙率大、通透性好、机械强度高、压力低、高通量等优点，有利于---及---类疫l苗生物大分子的分离纯化。

 层析技术具有分离纯化，条件温和且容易保持目标分子的生物活性，因此成为生物制药分离纯化主要工具。但下游层析分离纯化技术牵涉到材料、生物、化学及设备等交叉技术领域。因此研究下游分离纯化技术的人才较少，另外上游基因工程技术几乎在所有高校都有研究团队，而且培养了大量的人才，而下游分离纯化技术却很少在高校有专门研究，也缺乏相关的课程来培养分离纯化的人才。过去10多年上游基因工程的迅猛发展虽然带来上游发酵成本的大幅度下降，但下游分离纯化技术进步缓慢使其成本居高不下。因此要降低抗l体生产成本关键就是要解决下游分离纯化的瓶颈问题。

抗l体的层析分离步骤基本都可以采用标准化的三步曲：步用protein a介质进行抗l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余dna，endotoxin,protein a 等微量杂质。在这三步抗l体的分离纯化过程中，步的protein a亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是protein a 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，protein a使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，protein a 用于抗l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗l体的生产成本，解决抗l体的生产瓶颈关键在于改进步protein a 亲和捕获。