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纽斯特生物的elisa试剂盒适用于检测经过---处理而终止内源性磷酸二酯酶活性的camp样品。这种样品可直接应用于检测,而不需要蒸发和进一步的处理。
组织样本需预先冰冻于液氮中。在不锈钢研钵中用液氮将组子样本研磨成精细粉末。待液氮挥发完后,称量冰冻组织样本并加入10倍体积的0.1m hcl混匀。室温以大于600g离心力离心,取上层清夜用0.1m hcl稀释至适当浓度。
灵敏度
通过比较10个b0孔平均光密度值(od)和10个5号管标准品的平均光密度值,计算出灵敏度。camp浓度的检测---通过标准曲线上0位置的两个标准偏差来测定。
od(b0平均数) =0.685± 0.003
od5号 标准品平均数=0.604± 0.010
光密度偏差(0-0.4 pmol/ml) =0.081
2 sds of the zero standard =0.006
灵敏度 =081.0006.0/0.8×0.4 pmol/ml =29.6 fmol/ml
因此为筛选出腺苷酸环化酶的激l活剂或磷酸二酯酶的抑制l剂,需要一个高敏感度、特---的、可重复的方案用于检测c---的含量。考虑到大分子的化合物可能存在较弱的影响,这一个初筛是有-的。
目前商业化提供的一些c---检测试剂盒主要使用的是非亲和纯化的c---多克l隆抗l体。尽管据称有特---,但这些多克l隆抗c---抗l体与camp和gtp呈现一定程度的交叉反应。且在大多数细胞类型中,c---含量低于camp 100倍。
武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd,系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖高新技术开发区光谷生物城.美国neweastbio-于生命科学和生物技术领域,主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等。
酶标记抗l体工作浓度的选择:首先用直接elisa法进行初步效价的滴定见酶标记抗l体部份。然后再固定其它条件或采取“方阵法”包被物、待检样品的参考品及酶标记抗l体分别为不同的稀释度在正式实验系统里准确地滴定其工作浓度。
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