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有关单独采用碱法提取胶原蛋白的---不多,一般是碱法提取和酸法提法结合使用。比如在4℃条件下,鱼骨用0.1mol/l的naoh浸泡6h,再用2.5%nacl浸泡6h去除杂蛋白,用10%的异溶液去除脂肪。
采用酶法提取胶原蛋白时,必须严格控制提取条件:首先,酶作用时间必须适当。如果时间过短,胶原蛋白就不能充分释放到提取液中,影响提取率;如果酶作用时间过长,胶原蛋白会水解过度,产生过多的苦味小分子低聚肽,不仅会增加分离纯化的难度。
盐析法一般采用高浓度nacl;离心法常选用制备型低温离心机;电泳法多采用十二烷基---钠聚---凝胶电泳法sds-page,该法既可用于胶原蛋白的分离纯化,还可用来测定胶原蛋白分子的相对分子。
像有人用破碎、酶解、盐析三步法提纯苏尼特羊骨骼i型胶原蛋白。先去除骨头里的非胶原物质,然后往沉淀中10%的胃蛋白酶,在4℃的条件下---24h,以14000r/min离心40min。弃沉淀往上清液中加nacl,使它终浓度达到0.9mol/l。
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