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pcr的创建

khorana (1971)等zui早提出-体外扩增的设想：“经dna变性，与合适的引物杂交，用dna聚合酶延伸引物，并不断重复该过程便可合成trna基因。”但由于当时基因序列分析方法尚未成熟，热稳定dna聚合酶尚未---以及引物合成的困难，这种想法似乎没有实际意义。加---子克1隆技术的出现提供了一种克1隆和扩增基因的途径，所以khorana的设想被人们遗忘了。

1983年4月的一个星期五晚上，他开车去乡下别墅的路上,猛然闪现出“多聚酶链式反应”的想法。

1983年12月，mullis用同位素标记法看到了10个循环后的49 bp长度的第yi个pcr片段；

1985年，kary mullis在cetus公司工作期间，发明了pcr。mullis要合成dna引物来进行测序工作，却常为没有足够多的模板dna而烦恼。

1985年10月25日申请了pcr的专1利，

1987年7月28---准专1利号4,683,202 ，mullis是第yi个发明人；

1985年12月20日在science杂志上发表了第yi篇pcr的学术论1文，mullis是共同作者；

1986年5月，mullis在冷泉港实验室做专题报告，全从此开始学习pcr的方法。

la pcr的原理

la pcr的关键是具有3′***5′exonuclease活性 (proof reading活性) 的耐热性dna聚合酶。在pcr过程中当有错误的碱基摄入时，反应性能将大幅度下降，takara ex taq 和takara la taq 依靠3′***5′exonuclease活性可将错配的碱基除去，从而延伸反应能顺利地进行下去，使长链dna的扩增成为可能。

梯度pcr仪

把---pcr扩增可以设置一系列不同的退火温度条件温度梯度，通常12钟温度梯度，这样的仪器就叫梯度pcr仪。

工作模式和原理同普通pcr仪一样，它出了又普通pcr仪的功能外还多了一个梯度退火功能。dna部分片段的扩增对温度的控制精度要求---高，不同的dna部分片段其退火温度不一样，通过计算dna部分片段中的cg碱基的含量只能初步的判断出zui优退火温度在+5℃范围内，如果用普通pcr仪进行研究，需重复扩增很多次，然后做电泳进行分析来确定zui优退火温度。而梯度pcr仪则只需要一次就可以完成，在节省了时间的同时提高了实验的---性和准确性。主要用于研究未知dna退火温度的扩增，这样节约成本的同时也节约了时间和经费。在不设置梯度的情况下，梯度pcr仪也可以做普通pcr扩增。

该仪器主要应用于科研，教学机构，医学---研究，---院校，---分析，-等。