T载体「多图」

基因的分子手术是相当复杂的过程，其中zui重要的是连接酶

互补碱基之间的配对，形成双链。并在dna连接酶的作用下，使同一dna分子的两端连接成环状，或使两个分子连成一大的线状分子。不同---性内切酶切割dna产生的三种不同类型的末端。

基因的分子手术是相当复杂的过程，除了需要---性内切酶外，还需要其他- -些工具酶包括连接酶、dna 聚合酶、rna聚合酶、---酶、末端修饰酶等，对dna或rna进行各种各样的修饰。其中zui重要的是连接酶。

dna新链的延伸由dna聚合酶 iii所催化。为了copy的不断进行，解旋酶须沿着模板前进, 边移动边解开双链。由于dna的解链，在dna双链区势必产生正超螺旋，在环状dna中更为明显，当达到一定程度后就可能造成copy叉难以再继续前进，但在细胞内dna的copy不会因出现拓扑学问题而停止，因为拓扑异构酶会解决这一问题。

随着引发体合成rna引物，dna聚合酶 iii开始不断地将引物延伸，合成dna。dna聚合酶 iii是一个多亚基复合二聚体，一个单体用于前导链的合成，另一个单体用于滞后链的合成，因此它可以在同一时间分别copydna前导链和滞后链。虽然dna前导链和滞后链copy的方向不同，但如果滞后链模板环绕dna聚合酶iii,并通过dna聚合酶 iii,然后再折向未解链的双链dna的方向，则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向进行。

制备互补dna，往往需要先分离从目的基因转录来的mrna.如果该基因编码的蛋白质是细胞中的主要蛋白质，则此基因的产物是总mrna的主要组成部分 [2]  。就胰岛b细胞而论，此细胞含有高水平---前体mrna，后者有时可以沉淀正在翻译的mrna的核糖---白体，如果用特异结合所表达的蛋白质(抗原)，则可从沉淀的核糖体中分离出---特异的mrna，一般特异mrna只是细胞总mrna中的次要成分。在这种情况下，不得不以密度梯度离心，按分子量大小把总mrna分开，然后把分离开的mrna直接用于试管中表达蛋白质(用家兔网织细胞的溶胞产物或小麦胚芽提取物作为翻译系统的---物)再用沉淀或聚---凝胶电泳从许多表达的蛋白中测定出目的蛋白，从而确定表达该蛋白的特异mrna。