探针-量试剂优惠报价 武汉友名生物公司
出现的pcr扩增条带与目的靶序列条带一致,有时其条带更整齐,亮度更高。
引物设计不合适:选择的扩增序列与非目的扩增序列有同源性,因而在进行pcr扩增时,扩增出的pcr产物为非目的性的序列。靶序列太短或引物太短,容易出现假阳性。需重新设计引物。
靶序列或扩增产物的交叉污染:这种污染有两种原因:一是整个基因组或大片段的交叉污染,导致假阳性。这种假阳性可用以下方法解决:操作时应小心轻柔,防止将靶序列吸入加样枪内或溅出离心管外。除酶及不---高温的物质外,所有试剂或器材均应高压消毒。所用离心管及样进枪头等均应---使用。---时,在加标本前,反应管和试剂用紫外线照射,以破坏存在的-。二是空气中的小片段-污染,这些小片段比靶序列短,但有一定的同源性。可互相拼接,与引物互补后,可扩增出pcr产物,而导致假阳性的产生,可用巢式pcr方法来减轻或消除。
污染的监测
一个好的实验室,要时刻注意污染的监测,考虑有无污染是什么原因造成的污染,以便采取措施,防止和消除污染。
1、阳性对照:在建立pcr反应实验室及一般的检验单位都应设有pcr阳性对照,它是pcr反应是否成功、产物条带位置及大小是否合乎理论要求的一个重要的参考标志。阳性对照要选择扩增度中等、重复性好,经各种鉴定是该产物的标本,如以重组质粒为阳性对照,其含量宜低不宜高100个拷贝以下。但阳性对照尤其是重组质粒及高浓度阳性标本,其对检测或扩增样品污染的可能性很大。因而当某一pcr试剂经自己使用稳定,检验人员心中有数时,在以后的实验中可免设阳性对照。
2、阴性对照:每次pcr实验务必做阴性对照。它包括:
1标本对照:被检的标本是血1清就用鉴定后的正常血1清作对照;被检的标本是组织细胞就用相应的组织细胞作对照。
2试剂对照:在pcr试剂中不加模板dna或rna,进行pcr扩增,以监测试剂是否污染。
3、重复性试验。
4、选择不同区域的引物进行pcr扩增。
pcr技术不仅可用于基础研究,还适用于日常的---诊断、---学调查和农业生物技术研究。这些应用要求---的性能、及时的灵敏度和严格的标准。因此,所使用的pcr仪和pcr试剂必须符合这些要求和目的。
分子诊断应用包括---、---突变检测以及感1染性---检测。在---学中,利用 pcr进行人类身份鉴定是通过对---的短串联重复序列str进行扩增而区分个体的。在农业学中,pcr在食物病原体检测、育种植物基因分型和 gmo测试中具有重要作用。
联系时请说明是在云商网上看到的此信息,谢谢!
本页网址:https://www.ynshangji.com/xw/22035425.html
声明提示:
本页信息(文字、图片等资源)由用户自行发布,若侵犯您的权益请及时联系我们,我们将迅速对信息进行核实处理。