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mtt检测

mtt 是一种检测细胞存活和生长的方法。其检测原理为活xi胞线粒体中的---脱氢酶能使外源性 mtt 还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒formazan并沉积在细胞中，而---无此功能。二jia基---dmso能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免yi检测仪在 570nm 波长处测定其光吸收值，可间接反映活xi胞数量。结论:用贴壁法成功建立了大鼠血管内皮细胞体外培养方法,冻存细胞存活率高,为体外研究提供了稳定的模型。

血管生成技术

一、服务介绍

zhong瘤血管生成是一个极其复杂的过程，一般包括包括血管内皮基质降解、内皮细胞移行、内皮---、内皮细胞管道化分支形成血管环和形成新的基底膜等步骤。由于zhong瘤组织这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种微血管容易发生渗漏，因此肿liu细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。软琼脂培养克l隆形成试验基本步骤:(1)取对数生长期细胞，用0。

血管生成angiogenesis是指源于已存在的mao细血管和毛xi血管后微静脉新的mao细血管性血管的生长。无论原发性zhong瘤还是继发性zhong瘤，一旦生长直径超过1~2 mm，都会有血管生成。这是由于zhongt瘤细胞自身可分泌多种生长因子，-血管生成。骨吸收陷窝在共培养7天后开始出现,随着培养时间的延长,陷窝面积呈增加趋势。

骨sui内皮祖细胞的分离培养

方法:使用密度梯度离

心法汲差速贴壁法联合的方法培养内皮祖细胞,在倒置显微镜下观察细胞生长情况及形态变化，使用dil标记的---化低密度脂蛋白和fitc标记的荆豆凝集素1双荧光染色、流式细胞仪检测细胞表面抗原cd34、cd133 表达情况.结果与结论:培养前4 d---不明显第5~10天迅速增殖，并可见细胞集落及线状结构形成培养第7天的内皮祖细胞具有吞噬dil标记的---化低密度脂蛋白和fitc标记的荆豆凝集素1的功能流式细胞仪检测体外培养第十天的细胞,cd133+细胞占19.2%,cd34+细胞占28.7%,cd34+ /cd133+细胞占19.1%.说明密度梯度离心法联合差速贴壁法可在体外有效分离培养大鼠骨sui内皮祖细胞.

大鼠脂肪的分离

 将手术切取的大鼠脂肪组织尽量剪碎后移至离心管，其余步骤与人脂肪的分离一致。

 经手术切除获得的大鼠皮下脂肪组织---后原代培养24 h，且肉眼观察会发现培养瓶底部贴附着一层网状薄膜，轻轻摇晃培养瓶可使这层网状薄膜从瓶壁上脱落，镜下观 察发现大部分细胞都附着于这层膜上，通过术获取的人脂肪组织---后则无此现象。增加胶原酶的量和---时间也无法避免，取材时的或脂肪间结缔组织未被完全---，穿过细胞筛进入了培养瓶并沉淀于瓶底部形成的。胶原蛋白酶虽然可以特---水解胶原蛋白的三维螺旋结构，但不会损伤其他蛋白质。处理方法是37 ℃下用胰蛋白酶 ---5 min。然后利用40 μm的细胞筛过滤后传代。由于zhong瘤组织这种新生血管结构及功能异常，且血管基质不完善，这种微血管容易发生渗漏，因此肿liu细胞不需经过复杂的侵袭过程而直接穿透到血管内进入血流并在远隔部位形成转移。 根据作者的经验，每毫升手术切除的大鼠脂肪可分离基质血管成分细胞约1.81×106个。原代培养2.24×107个大鼠基质血管成分细胞，40 h后传代时约剩余 6.2×106个细胞，细胞剩余率27%。