滨州MCX固相萃取柱厂家的行业须知「硕谱生物」

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为何在 spe操作中会出现流速非常慢或流速不一致，回收率较低，且平行性差？也许很多小伙伴都遇到过这样的问题。小子选错了，方法有问题吗？或者填充材料的粒度分布不均匀，填充松紧度不稳定？实际上 spe小柱每批流速都有严格的控制范围，在控制范围内的小柱可以---稳定的流速，超出控制范围的小柱将作为异常品处理。那么，是否可以采用一种稳定的方法，用出厂流速测试合格

实际上还有一个很容易被大家忽视的细节也会导致流动速度过慢： spe小柱在运输过程中筛板和填料可能会发生微小的松动，导致空气进入填料(一般不容易被肉眼看到)，含气填料在气压下会导致溶剂流动缓慢。这一点大家都能理解，为什么同一批小柱子会出现流速不平衡的情况

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正压除气泡

试样数量较少，填充量较小，人工施加正压较为方便，可采用针筒连接接头法进行正压排除气泡。

□负压排泡

试样量较大，填料量大，人工施加正压不便，可用真空泵连接固相萃取装置，负压排出气泡。

1.2排气泡的时间？

在 spe操作中，一般包括平衡活化、上样、淋洗、洗脱四步。是否每个步骤都需要一个排气泡？但是，一般情况下，当填料之间有空隙时，需要排出气泡，例如，当平衡液被激1活后，需要排出气泡，使溶液能---地与填料接触。

另外还有一个容易忽略的环节也是需要排出气泡的，一般淋洗后需要进行抽干操作，抽干后填料间也会有空气进入，加入洗脱液后，也是要排出气泡的，否则大量的气泡也会---影响洗脱液的流速和洗脱效果。

相对于弱酸性化合物而言，弱碱性化合物在阳离子交换固相萃取过程中99%的分解都是阳离子，这一弱碱性化合物所处的环境系统的 ph值必须低于其 pka至少两个 ph单位。洗脱时，环境体系的 ph值应高于化合物的 pka值至少两个 ph单位，99%的化合物此时为中性状态，可通过适当的溶剂从阳离子交换柱中洗脱。

选择离子交换固相萃取柱的种类：为能有效地洗脱吸附在一起的离子化合物，对于含有强离子---团的目标化合物，一般选用弱离子交换柱；对于含有弱离子---团的化合物，一般选用强离子交换柱。该方法可避免目标化合物与吸附剂---团同时处于离子化状态，使目标化合物始终保持在不能洗脱的保留状态。

反相式c18分离柱

c18是十八烷基碳链上的反相固定相的统称。除以普通硅胶为基质外，以c18链为基质的高聚物小球、氧化铝、氧化---等反相固定相，均可称为c18链。有很多种类型的c18，常见的c18是硅胶基质，称为 ods,c18能够在纯水中工作，被称为c18-aq。

c18反相柱的固定相为非极性固定相，流动相极性大于固定相极性，常用的溶剂一般为水和甲1醇、乙1腈、---呋1喃、---1醇等与水互溶的溶剂，适合分离非极性或弱极性的化合物，其洗脱顺序一般为样品极性从高到低。

在选择c18反相分离柱时，应根据样品情况，改变流动相的组成或溶剂强度，以提高分离度、选择性或保留时间。

反相法c18在分离过程中，水可以与水-甲1醇、水-乙1腈、水----呋1喃等多种有机溶1剂混合，而且分离效果也---。适当的改良剂，如三乙1胺或乙1酸，可抑制硅胶表面残余硅---的酸性，从而减少对酸或碱性组分的保留，并减少拖尾；同时，对流动相 ph值的调节，可---改变酸性或碱性组分的选择性。对酸性组分，流动相 ph<7时，增加色谱柱的保留时间；对碱性样品，流动相 ph***7时，将碱性组分分为游离型(rnh2)，极性小，保留时间增大，可在固定相和流动相之间多次分布，提高碱性组分的选择性。

回收率

当一个完整的 spe操作过程中，目标化合物可能会出现在出液、淋洗、洗脱液或吸附剂中，当“目标物不能回收或回收率低”现象出现时，则向样品溶液中加入标液，然后进行一个完整的 spe操作，分别收集出液、淋洗液和洗脱液并进行分析。

先确定目标化合物存在于哪个部分，然后确定问题来自以下哪个环节：目标化合物不能保留在吸附剂中；没有完全洗脱；其他环节。

目标化合物在吸附剂中保留度不足

在样品流出液或淋洗液中发现5%以上的目标化合物时，可得出“不能保留目标化合物在吸附剂中”的结论。

2.目标化合物未完全洗脱

在样本溶液流出液和淋洗液中没有出现目标化合物，而在洗脱液中只出现少量或不出现目标化合物，则判断为“目标物未完全洗脱”

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在实际工作中，人们经常希望 spe柱可以多次使用以降低成本。美国瓦瑞安公司生产的 bond elut certify spe柱(j. chromatogr.137:619;1993)的重复使用情况：当样本基液为血浆时，该 spe柱经再生后可重复使用2-3次(回收率可维持80%以上)。据报告，还可重复使用10次 spe柱(j. chromatogr.307:371;1986)。这种新型薄膜 spe柱的再生相对比较容易，而且可以多次重复使用。

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有些人曾尝试过15次以上重复使用这种类型的柱子。固相萃取柱的再利用主要依赖于样品基液的复杂性。越复杂的基液，越不可能重复使用 spe柱。要小心地重复使用 spe柱。，使用过的 spe柱子必须再生。---的方法是用完后立即再生。二是要对再生后的 spe柱进行评价，---其本底可接受，回收率可接受。

固相萃取小柱 spe工艺的基本步骤：

萃取柱的活性处理：选择一种溶剂通过 spe小柱润湿和活化 spe填料，使分析物能够与固相表面紧-触，易于发生吸附作用，并可去除柱中可能存在的杂质，减少污染；随后还要选择一种易更换的溶剂，该溶剂具有---毒性， ph值与样品基体相似，可使样品溶液与吸附剂表面---接触，提高粗去效率。