河北东曹TOYOPEARL 疏水层析填料采购- 慧德易科技公司

抗l体的层析分离步骤基本

都可以采用标准化的三步曲：步用protein a介质进行抗

ffffff;>l体捕获和浓缩；第二步用离子交换进行中间纯化以去除多聚体，宿主蛋白等杂质；第三步是精纯去除剩余dna，endotoxin,protein a 等微量杂质。在这三步抗

ffffff;>l体的分离纯化过程中，步的protein a亲和捕获占据分离纯化成本80%以上，也是下游分离纯化的瓶颈所在。亲和层析之所以成本高的主要原因：首先是protein a 价格昂贵，其价格是普通层析介质十几倍；第二，protein a使用寿命短，一般离子交换填料使用寿命多达1000次，而亲和填料寿命通常在100-200次；第三，protein a 用于抗

ffffff;>l体的捕获和浓缩，需要处理大体积的发酵液，而亲和步骤载量往往又低于阴阳离子交换层析，使得亲和层析介质使用量比中间纯化或精纯的要多得多。因此，要降低抗

ffffff;>l体的生产成本，解决抗

ffffff;>l体的生产瓶颈关键在于改进步protein a 亲和捕获。

离子交换层析中,为什么用氯离子洗脱阴离子

阴离子交换柱的填料是正电填料,在低盐条件下可以通过电荷相互作用吸附样品中的阴离子和负电荷物质如dna.这些带负电的物质由于其带电量不同,分子大小不同,因而与正电填料之间的结合力也就不同.用梯度的氯离子一般用---梯度,例如从100mm---线性梯度升高到1m---洗脱挂柱样品时,氯离子会和结合上的物质竞争结合正电填料,伴随着氯离子浓度的不断升高,氯离子的竞争作用越来越强,与填料结合的物质会按照亲和力从弱到强依次洗脱下来,形成独立的洗脱峰,从而将这些物质分开.

阳离子交换柱与之正好相反,柱子填料为负电荷,用钠离子洗脱结合的正电物质.

连续色谱层析简介

众所周知，传统色谱分离技术是采用固定的色谱塔进行，---入一定量物料，然后采用洗脱剂不断洗脱，在同一出口在不同时间段就可接到不同的产品组分，此过程明显费时费力；而连续色谱分离技术则是利用不同物质在由固定相和流动相构成的体系中具有不同的分配系数，当两相作相对运动时，这些物质随流动相一起运动，并在两相间进行反复多次的分配，从而使各物质达到分离。在实际生产中，连续流层析可获得更高的产量，且成本---，这是通过降低protein a 填料用量和缓冲液消耗量实现的，由于操作稳定，其可---地---产品的一致性，并---提高下游纯化的产量。传统色谱分离方式通常是单一色谱柱序列上样和洗脱，这就明显---了介质的利用程度，而连续色谱层析技术平行采用多根色谱柱平行上样和洗脱，这种连续上样的方式无疑能够

ffffff;>i大化介质的利用率。