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液相色谱柱基本工作原理

在色谱法中存在两相，一相是固定不动的，我们把它叫做固定相；另一相则不断流过固定相，我们把它叫做流动相。

色谱法的分离原理就是利用待分离的各种物质在两相中的分配系数、吸附能力等亲和能力的不同来进行分离的医学教育网搜集整理。

使用外力使含有样品的流动相(气体、液体)通过一固定于柱中或平板上、与流动相互不相溶的固定相表面。当流动相中携带的混合物流经固定相时，混合物中的各组分与固定相发生相互作用。

由于混合物中各组分在性质和结构上的差异，与固定相之间产生的作用力的大小、强弱不同，随着流动相的移动，混合物在两相间经过反复多次的分配平衡，使得各组分被固定相保留的时间不同，从而按一定次序由固定相中先后流出。与适当的柱后检测方法结合，实现混合物中各组分的分离与检测。

液相色谱柱的保存

1.反向色谱柱实验后的保养：

使用缓冲液或含盐的流动相，实验完后应用10%的/水冲洗30分钟，洗掉色谱柱中的盐，再用冲洗30分钟。注意：不能用纯水冲洗柱子，应该在水中加入10%的，防止将填料冲塌陷。

2.长期保存色谱柱：

如，色谱柱要长时间保存，必须存于合适的溶剂下，对于反相柱可以储存于纯或中，正相柱可以储存于严格脱水后的纯正---中，离子交换柱可以储存于水中，并将堵头堵上，储存温度尽量是室温。

液相色谱柱性能评价

色谱柱的性能除了与固定相性能有关外，还与填充技术有关。在正常条件下，填料粒度>;20μm时，干法填充制备柱较为合适；颗粒<20μm时，湿法填充较为理想。填充方法一般有4种：高压匀浆法，多用于分析柱和小规模制备柱的填充；径向加压法，waters；轴向加压法，主要用于装填大直径柱；干法。柱填充的技术性很强，大多数实验室使用已填充好的商品柱。

液相色谱柱作用

柱子失效通常是柱端部分，在分析柱前装一根与分析柱相同固定相的短柱5~30mm，可以起到保护、延长柱寿命的作用。采用保护柱会损失一定的柱效，这是值得的。通常色谱柱寿命在正确使用时可达2年以上。以硅胶为基质的填料，只能在ph2~9范围内使用。柱子使用一段时间后，可能有一些吸附作用强的物质保留于柱顶，---是一些有色物质更易看清被吸着在柱顶的填料上。新的色谱柱在使用一段时间后柱顶填料可能塌陷，使柱效下降，这时也可补加填料使柱效恢复。

每次工作完后，---洗脱能力强的洗脱液冲洗，例如ods柱宜用冲洗至基线平衡。当采用盐缓冲溶液作流动相时，使用完后应用无盐流动相冲洗。含卤族元素氟、氯、的化合物可能会腐蚀不锈钢管道，不宜长期与之接触。装在hplc仪上柱子如不经常使用，应每隔4~5天开机冲洗15分钟。