腺-载体系统- 友名生物公司

真核细胞同源重组法

1994 年，graham f建立了在293细胞同源重组产生重组腺---的方法。这个方法需要2个质粒：骨架质粒含有腺---绝大部分基因组序列，但不含有包装信号；穿梭质粒含有itr、包装信号和目的基因克1隆位点，以及两段与骨架质粒有重叠的序列。将目的基因克1隆到穿梭质粒，与骨架质粒共转染293细胞，由于这两个质粒的部分序列有重叠，能够在细胞内发生同源重组，zui终产生完整的载体基因组，并包装出重组---颗粒。该方法曾经被广泛使用，推动了腺---载体的发展。由于细胞内重组效率低，某些重组事件还可能产生可copy---(rcv)，必需经过噬斑纯化才能获得正确的克1隆化的重组---，费时费力，正逐渐被其他方法替代。

腺---的结构

腺---含13%dna和87%的蛋白质，---体分子量约为175×106。---基因组为线状双链dna，大约含35kb～36kb，腺---12、18和31型的dna组成中，g+c mol%zui低48%～49%，属于对动物具有高---性基因型。腺---1、2、4、5、8等型的g+c mol%较高61%，---性反而低或无。这是一种用于人腺---分离株的分组的标准，根据其基因同源性将人腺---分为a～f等6组。

启动子：rna聚合酶特---识别结合和启动转录的dna序列。有方向性，位于转录起始位点上游。上游启动子元件：tata盒上游的一些特定dna序列，反式作用因子可与这些元件结合，调控基因的转录效率。反应元件：与被的信息分子受体结合，并能调控基因表达的特异dna序列。增强子：与反式作用因子结合，增强转录活性，在基因任意位置都有效，无方向性。沉默子：基因表达负调控元件，与反式作用因子结合，抑制转录活性。poly(a)加尾信号：结构基因末端保守的aauaaa顺序及下游gt或t富含区，被多聚腺苷酸化特异因子识别，在mrna 3′端加约200个a。2反式作用因子：能识别和结合特定的顺式作用元件,并影响基因转录的一类蛋白质或rna。