IP-WB活性检测试剂盒价格合理

武汉纽斯特生物科技有限公司wuhanneweastbiotechonologyco.ltd，系美国生命科学试剂供应商美国neweastbio在中国的子公司。公司位于武汉东湖-开发区光谷生物城.美国neweastbio---于生命科学和生物技术领域，主要产品有小分子、elisa试剂盒、蛋白等，与高校和研究所、大制药公司、生物科技公司和医院等客户建立了长期稳定的合作关系，产品销往全球。

产品描述

    arf6adp-核糖基化因子6是arf超家族的成员。 arf基因编码小的gtpases，它们会增加霍l乱毒l素的adp-核糖基转移酶活性，并且对于作为磷脂酶d的激l活剂的囊泡运输---。alf6调节膜运输并起吞噬作用的调节分子的作用。

测定步骤

i.主动arf 6下拉分析

1.将0.5 – 1 ml细胞裂解液等分到微量离心管中。

2.使用1x分析/裂解缓冲液将每个样品的体积调整为1 ml。

3.在管中加入1 μl抗活性arf 6单克l隆抗l体。

4.通过涡旋或滴定---重悬蛋白a / g琼脂糖珠浆。

5.快速向每个管中添加20 μl重悬浮的珠浆。

6.轻轻搅拌将试管在4°c下孵育1小时。

7.通过以5,000 x g离心1分钟来沉淀小珠。

8.吸出并丢弃上清液，---不要干扰/除去珠粒。

9.用0.5 ml的1x assay / lysis buffer洗涤磁珠3次，每次离心并吸出。

10.后一次洗涤后，将珠粒沉淀并小心除去所有上清液。

11.将磁珠沉淀重悬于20 μl 2x还原sds-page样品缓冲液中。

12.将每个样品煮沸5分钟。

13.以5,000 x g的速度离心每个样品10秒钟。

免l疫印迹和检测所有步骤均在室温下搅拌

1.在电印迹步骤之后，将pvdf膜浸入100％甲l醇中15秒钟，然后使其在室温下干燥5分钟。注意：如果使用硝l酸纤维素代替pvdf，则应跳过此步骤。

2.在室温下不断搅拌下，在tbst中用5％脱脂奶粉或3％bsa封闭膜1小时。

将膜与抗arf 6兔多克l隆抗l体在5％脱脂奶粉或3％bsa / tbst中以1：50?1000取决于样品中arf 6蛋白质的量新鲜稀释，孵育1-在室温下持续搅拌2小时或过夜4oc。

3.用tbst将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。

4.将膜与二抗例如山羊抗兔igg，hrp偶联物一起孵育，在室温下以恒定的比例在5％脱脂奶粉或3％bsa / tbst中以1：1000的比例新鲜稀释。搅动。

5.用tbst将印迹的膜清洗3次，每次5分钟。

6.使用您选择的检测方法，例如ecl。

检测步骤

ι。活性cdc42 pull-down实验

1. 等分0.5-1 ml的细胞裂解物至微量离心管中。

2. 向管中加入1ml的1x assay/lysis 缓冲液。

3. 向管中加入1ul的活性cdc42单克l隆抗l体。

4. 用涡旋振荡仪将protein a/g凝胶柱充分混匀，然后快速的吸出20ul悬浮珠浆液加入离心管中。

5. 将管置于4°c条件下孵育1h，并轻轻的进行摇动。

6. 5000g，离心1分钟。

7. 弃上清，这一步要非常小心以避免珠子的损失。

8. 用0.5 ml的1x assay/lysis缓冲液洗涤珠子三次，离心并弃去上清。

9. 后一次洗涤后，小心的移去所有的上清。

10. 用20ul的2x sds-page样品缓冲液重悬样品。

11. 样品煮沸5min。

12. 5000g，离心10s。