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DNTP MIXTURE免费咨询 友名生物公司

发布者:武汉友名生物技术有限公司  时间:2021-11-10 







dna连接酶与dna聚合酶的区别?


形成方式不同

dna连接酶是在两个dna部分片段之间形成磷酸二酯键,不是在单个核苷酸与dna部分片段之间形成磷酸二酯键。dna连接酶都不能催化两条游离的dna链相连接。

dna聚合酶只能将单个核苷酸加到已有的dna1片段上,形成磷酸二酯键。dna聚合酶起到催化剂的作用,催化原来的dna进行复1制,然后将原来的dna和复1制以后的dna进行模板配对后,连接聚合在一起,就可以形成新的dna链。




dna copy的引发

所有dna的 copy都是从固定起始点开始的,而目前已知的dna聚合酶都只能延长已存在的dna链,而不能从头合成dna链,那么一个新dna的 copy是怎样开始的呢?研究发现,dna copy时,往往先由引发酶在dna模板上合成一段rna引物,再由dna聚合酶从rna引物 3端开始合成新的dna链。对于前导链来说,这一引发过程比较简单,只要有一段rna引物,dna聚合酶就能以此为起点一直合成下去。但对于滞后链来说,引发过程就十分复杂,需要多种蛋白质和酶的协同作用,还牵涉冈崎片段的形成和连接。





dna新链的延伸由dna聚合酶 iii所催化。为了copy的不断进行,解旋酶须沿着模板前进, 边移动边解开双链。由于dna的解链,在dna双链区势必产生正超螺旋,在环状dna中更为明显,当达到一定程度后就可能造成copy叉难以再继续前进,但在细胞内dna的copy不会因出现拓扑学问题而停止,因为拓扑异构酶会解决这一问题。

随着引发体合成rna引物,dna聚合酶 iii开始不断地将引物延伸,合成dna。dna聚合酶 iii是一个多亚基复合二聚体,一个单体用于前导链的合成,另一个单体用于滞后链的合成,因此它可以在同一时间分别copydna前导链和滞后链。虽然dna前导链和滞后链copy的方向不同,但如果滞后链模板环绕dna聚合酶iii,并通过dna聚合酶 iii,然后再折向未解链的双链dna的方向,则滞后链的合成可以和前导链的合成在同一方向进行。





所有合成cdna条链的方法都要用依赖于rna的dna聚合酶(反转录酶)来催化反应,主要有两个关键因素,一个是mrna模板,另一个是反转录酶 [3]  。商品化反转录酶有从禽类成髓细胞瘤-纯化到的禽类成髓细胞-amv逆转录酶和从表达化的moloney鼠-反转录酶基因的大肠中分离到的鼠-mlv反转录酶。amv反转录酶包括2个具有若干种酶活性的多肽亚基,这些活性包括依赖于rna的dna合成,依赖于dna的dna合成以及对dna-rna杂交体的rna部分进行内切降解rna酶h活性。mlv反转录酶只有单个多肽亚基,兼备依赖于rna和依赖于dna的dna合成活性,但降解dna—rna杂交体中的rna的能力较弱。且其热稳定性较amv反转录酶差。mlv反转录酶能合成较长的edna如大于2~3kb。amv反转录酶和mi。v反转录酶利用rna模板合成cdna时的适ph、适盐浓度和适温度各不相同.所以合成链时相应调整条件是非常重要的。






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